[發(fā)明專(zhuān)利]一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410677500.9
• 申請(qǐng)日: 2014-11-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104406946A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周鵬;李娟;賈曉戈;陸乃彥;張軒
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，特別是利用熒光漂白恢復(fù)技術(shù)監(jiān)測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法。

背景技術(shù)

蛋白棒以其蛋白質(zhì)含量高和營(yíng)養(yǎng)豐富等優(yōu)點(diǎn)，受到軍人、運(yùn)動(dòng)員等特殊人群以及越來(lái)越多大眾的青睞。但是，目前市場(chǎng)上影響蛋白棒等產(chǎn)品發(fā)展的一個(gè)重要瓶頸原因是蛋白棒在貯藏過(guò)程中發(fā)生質(zhì)地硬化的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了蛋白棒的貯藏穩(wěn)定性和食用品質(zhì)，限制了蛋白棒等產(chǎn)品的發(fā)展。而針對(duì)蛋白棒在貯藏過(guò)程中質(zhì)地發(fā)生硬化的內(nèi)在機(jī)理原因尚存在爭(zhēng)議。

熒光漂白恢復(fù)技術(shù)(FRAP)是通過(guò)采用激光共聚焦掃描顯微鏡的高強(qiáng)度脈沖式激光照射生物體(例如：細(xì)胞)的某一區(qū)域，使得該區(qū)域的熒光分子淬滅。再利用低強(qiáng)度的激光掃描，來(lái)檢測(cè)該區(qū)域周?chē)谴銣鐭晒夥肿酉驘晒馄讌^(qū)域的擴(kuò)散過(guò)程。

在本發(fā)明中，通過(guò)借助熒光漂白恢復(fù)技術(shù)對(duì)蛋白棒模擬體系進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，從分子水平更直觀準(zhǔn)確的來(lái)觀測(cè)蛋白質(zhì)分子的遷移過(guò)程(包括遷移路徑、擴(kuò)散速度等信息)，進(jìn)而揭示造成蛋白棒尤其是在貯藏初期產(chǎn)品質(zhì)地發(fā)生硬化的內(nèi)在機(jī)理原因。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)目前市售蛋白棒等產(chǎn)品在貯藏過(guò)程中發(fā)生質(zhì)地硬化及其硬化機(jī)理尚不明確等問(wèn)題，本申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)研究，通過(guò)利用熒光漂白恢復(fù)技術(shù)，提供一種直觀監(jiān)測(cè)蛋白棒在貯藏過(guò)程中穩(wěn)定性發(fā)生變化的方法，為今后解決有關(guān)蛋白棒質(zhì)地硬化以及預(yù)測(cè)產(chǎn)品貨架期等問(wèn)題提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，其特征在于步驟如下：

(1)蛋白棒模型體系的制備。蛋白棒模型體系的配方如表1所示：

表1?蛋白棒模型體系制備配方

在本發(fā)明中，具體實(shí)驗(yàn)步驟為：將2.5g山梨醇溶解于1.25g超純水中，再加入1.75g甘油進(jìn)行攪拌。攪拌均勻后，使其混合物與4.5g乳蛋白粉混合2min，并揉制成均勻的面團(tuán)。最后，將揉制好的面團(tuán)用封口膜密封以防止水分蒸發(fā)并放入裝有Mg(NO₃)₂過(guò)飽和溶液的干燥器中(a_w＝0.53)以待測(cè)定。將密閉容器在室溫下平衡0.5h后，進(jìn)行第0d的取樣。

(2)樣品熒光染色

配制0.1～0.4mg/mL的異硫氰酸熒光素(FITC)/丙酮染色液，將4～8μg該染色液滴加于0.5～1.0g的樣品中并進(jìn)行混合；混合均勻后，將其中0.3g樣品轉(zhuǎn)移至玻底培養(yǎng)皿中，蓋上蓋玻片，并用AB膠封邊；最后，將染色好的樣品置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中并避光儲(chǔ)存；此后，分別于第1、3、7d進(jìn)行取樣測(cè)定。

(3)熒光漂白恢復(fù)測(cè)定

觀測(cè)時(shí)，將染色好的待測(cè)樣品置于激光掃描顯微鏡的載物臺(tái)上，并設(shè)定樣品激發(fā)波長(zhǎng)為485～495nm，發(fā)射波長(zhǎng)為500～530nm，在1～20倍目鏡下進(jìn)行樣品觀測(cè)；在觀察區(qū)域內(nèi)選擇邊長(zhǎng)為20～50μm的正方形區(qū)域作為漂白范圍；設(shè)定熒光漂白強(qiáng)度100％，漂白程度為80％～100％；之后，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)漂白區(qū)域FITC-蛋白體系的熒光恢復(fù)情況，每隔一段時(shí)間進(jìn)行圖像采集記錄熒光恢復(fù)情況。

本發(fā)明的有益技術(shù)效果如下：

1.利用熒光漂白恢復(fù)技術(shù)能更直觀準(zhǔn)確的展現(xiàn)蛋白棒模擬體系內(nèi)部在貯藏過(guò)程中微觀結(jié)構(gòu)和分子遷移的變化，進(jìn)而可預(yù)測(cè)蛋白棒產(chǎn)品的品質(zhì)以及貨架期。

2.揭示了蛋白棒質(zhì)地發(fā)生硬化的原因是由于分子遷移聚集造成的，為解釋蛋白棒產(chǎn)品質(zhì)地發(fā)生硬化的現(xiàn)象提供了理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

附圖說(shuō)明

圖1A為實(shí)施例1中酪蛋白棒模擬體系貯藏第0天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖1B為實(shí)施例1中酪蛋白棒模擬體系貯藏第1天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖1C為實(shí)施例1中酪蛋白棒模擬體系貯藏第3天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖1D為實(shí)施例1中酪蛋白棒模擬體系貯藏第7天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖2A為實(shí)施例2中乳清蛋白棒模擬體系貯藏第0天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖2B為實(shí)施例2中乳清蛋白棒模擬體系貯藏第1天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖2C為實(shí)施例2中乳清蛋白棒模擬體系貯藏第3天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖2D為實(shí)施例2中乳清蛋白棒模擬體系貯藏第7天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖3A為實(shí)施例3中濃縮乳蛋白棒模擬體系貯藏第0天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖3B為實(shí)施例3中濃縮乳蛋白棒模擬體系貯藏第1天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；

圖3C為實(shí)施例3中濃縮乳蛋白棒模擬體系貯藏第3天熒光漂白恢復(fù)結(jié)果圖；