[發明專利]脂蛋白(a)定量測定試劑盒及其使用方法和應用

在審

• 申請號: 201410675279.3
• 申請日: 2014-11-21
• 公開（公告）號: CN105675872A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 沈海濤;李基;彭波;楊君;趙亞茹
• 申請（專利權）人: 上海科華生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/96
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

技術領域

本發明涉及醫學檢測和診斷領域。具體地說，本發明涉及定量測定人血清 或血漿中脂蛋白(a)的試劑盒以及所述試劑盒的使用方法和應用。

背景技術

脂蛋白(a)(Lp(a))是人血漿中的一類特別的脂蛋白顆粒，最早由Berg于1963年發現，主要由低密度脂蛋白顆粒和富含糖鏈的高度親水的apo(a)組成；其中每個apo(a)分子通過一個二硫鍵和一分子的apoB-100共價交聯。Apo(a)由三個完全不同的結構組成：未激活的蛋白酶區域、一個拷貝的K5環餅和多拷貝的K4環餅區。

研究表明，人血漿中Lp(a)濃度的升高與心血管功能的紊亂及腦血管疾病相 關，血漿中Lp(a)濃度的升高通常預示著早期的冠狀動脈和梗阻風險的增加，同 時由于Lp(a)基本濃度具有高度的遺傳性，因此，Lp(a)是早期冠心病(CHD)的重 要預示因子，對其進行檢測對于心血管疾病的預測具有重要意義。

目前，已知的檢測脂蛋白(a)濃度的方法有酶聯免疫法、放射免疫法、熒光 免疫測定法等檢測方法，但上述測定方法的操作比較復雜，檢測用時長，過度 浪費資源的缺點，不適合做常規檢測。例如，CN103149370A公開了一種脂蛋 白(a)定量測定試劑盒，該試劑盒利用脂蛋白(a)的多克隆抗體包被乳膠顆粒并且 在試劑R2中利用阿斯巴甜減輕血清中類風濕因子對于檢測的干擾，但該試劑盒 以及目前市場上的脂蛋白(a)定量測定試劑盒大都采用脂蛋白(a)多克隆抗體； CN102749459A公開了一種脂蛋白(a)的檢測試劑盒，其利用結合有脂蛋白(a)單 克隆抗體的乳膠顆粒；CN103604930A公開了一種脂蛋白(a)的檢測試劑盒，其 利用脂蛋白(a)單抗乳膠微球，能夠解決與纖溶酶原有交叉反應以及類風濕因子 對于檢測的干擾的問題；CN103454193A公開了利用包被有脂蛋白(a)單克隆抗 體的乳膠懸液的脂蛋白(a)的檢測試劑盒。但這些申請均并公開采用的是何種單 克隆抗體，而且這些試劑盒無法同時確保高靈敏度和低值區域的重復性。

因此，本領域急需穩定性好、檢測方便、同時具備高靈敏度和低值區域重 復性的脂蛋白(a)定量測定試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于提供一種人脂蛋白(a)的單克隆抗體標記的顆粒，以及包 含所述顆粒的檢測試劑盒，所述人脂蛋白(a)的單克隆抗體標記的顆粒以及檢測 試劑盒的穩定性好、檢測方便、同時具備高靈敏度和低值區域重復性。

在第一方面，本發明提供一種鼠抗人脂蛋白(a)單克隆抗體標記的顆粒，所述 鼠抗人脂蛋白(a)單克隆抗體是美國ABGENT公司生產的單克隆抗體(克隆號為 AO1237a)。

在優選的實施方式中，所述鼠抗人脂蛋白(a)單克隆抗體標記的顆粒在37℃保 存3天后，定標穩定性良好。在具體的實施方式中，本發明的鼠抗人脂蛋白(a) 單克隆抗體標記的顆粒在37℃保存3天后，測試20mg/L樣本的吸光度差值(ΔA) ≥0.04A。

在第二方面，本發明提供一種鼠抗人脂蛋白(a)單克隆抗體標記的顆粒的組 合，所述鼠抗人脂蛋白(a)單克隆抗體是美國ABGENT公司生產的單克隆抗體(克 隆號為AO1237a)；并且所述顆粒是具有不同粒徑的兩種或多種顆粒。

在優選的實施方式中，所述顆粒包括但不限于乳膠顆粒、磁珠；優選乳膠 顆粒；更優選表面帶羧基的聚苯乙烯膠乳顆粒。

在優選的實施方式中，所述顆粒的粒徑選自60-300nm。

在優選的實施方式中，所述顆粒是具有不同粒徑的兩種顆粒。

在優選的實施方式中，所述顆粒的粒徑分別選自60-150nm和150-280nm。

在優選的實施方式中，所述顆粒的粒徑分別是105nm和200nm。

在優選的實施方式中，所述具有不同粒徑的兩種顆粒的比例為40:60–60:40。

在優選的實施方式中，所述具有不同粒徑的兩種顆粒的比例為50:50。

在第三方面，本發明提供一種脂蛋白(a)定量測定試劑盒，所述試劑盒包含：

(1)樣品預處理劑；

(2)檢測劑；和

(3)任選的校準品；

其中，所述檢測劑包含本發明第一方面所述的鼠抗人脂蛋白(a)單克隆抗體標 記的顆粒，或本發明第二方面所述的鼠抗人脂蛋白(a)單克隆抗體標記的顆粒的組 合。