[發明專利]一種流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201410674716.X
• 申請日: 2014-11-21
• 公開（公告）號: CN104304037A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 霍麗妮;蘇鈦;陳睿;李培源;蘇煒;馬靜
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 靳浩

技術領域

本發明涉及植物快速繁殖方法，特別是一種流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法。

背景技術

石斛為蘭科植物金釵石斛Dendrobium?nobile?Lindl.、鐵皮石斛Dendrobium?candidum?Wall.ex?Lindl.或馬鞭石斛Dendrobium?fimbriatum?Hook.var.oculatum?Hook.及其近似種的新鮮或干燥莖。在我國傳統醫學中，石斛為常用珍貴藥材，始載于《神農本草經》，列為上品。

流蘇石斛(Dendrobium?fimbriatum?Hook.var.oculatum?Hook.)系蘭科石斛屬植物，莖粗壯，斜立或下垂，質地硬，圓柱形或有時基部上方稍呈紡錘形，葉二列，革質，長圓形或長圓狀披針形，總狀花序長5～15厘米，疏生6～12朵花，花金黃色，質地薄，開展，稍具香氣，花期4～6月，產廣西南部至西北部(天峨、凌云、田林、龍州、天等、隆林、東蘭、武鳴、靖西、南丹)、貴州南部至西南部(羅甸、興義、獨山)、云南東南部至西南部(西疇、蒙自、石屏、富民、思茅、勐海、滄源、鎮康)，海拔600～1700米，生于密林中樹干上或山谷陰濕巖石上，分布于印度、尼泊爾、錫金、不丹、緬甸、泰國、越南。《中國藥典》稱馬鞭石斛，具有益胃生津，生津止渴。用于陰傷津虧，口干煩渴，食少干嘔，病后虛熱，目暗不明。現代研究表明，流蘇石斛中發現的毛蘭素、毛蘭菲、鼓槌菲等化學成分具有抗腫瘤作用。

由于蘭科植物種子在野外很難發芽，自然繁殖主要是靠分株繁殖，繁殖率地下，自然更新困難，隨著社會的發展，人民對美的追求以及長期以來藥用的需求，造成野生資源的嚴重破壞，現野外已經很少能見到美麗的流蘇石斛。

發明內容

本發明的目的是提供一種流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法，直接取流蘇石斛的種子進行組織培養，有效縮短流蘇石斛的培養周期，減小因多次繼代培養造成的變異概率，采用組織培養所得的流蘇石斛組培苗，植株健壯，生長能力強，適于工廠化生產，以解決流蘇石斛人工種植的種苗問題。

本發明提供的技術方案是：

一種流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法，取流蘇石斛種子作為材料進行離體誘導培養，獲取流蘇石斛的組織培養苗。

優選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法中，包括以下步驟：

步驟一、將預處理的流蘇石斛種子播種于誘導培養基上，培養7-15天，得到流蘇石斛小芽，其中，所述誘導培養基為：以MS-H為基本培養基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L瓊脂，并調整誘導培養基的pH值為5.6-6.0；

步驟二、將流蘇石斛小芽置于繼代培養基中，培養30-40天，獲得流蘇石斛組培分化苗，其中，所述繼代培養基為：以MS為基本培養基，加入0.2.0-2.0mg/L激動素、2.0-4.0mg/L?6-芐氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L瓊脂，并調整繼代培養基的pH值為5.6-6.0；

步驟三、將流蘇石斛組培分化苗移栽至生根培養基中，培養30-40天后，轉移至自然光下照射培養40-50天，獲得流蘇石斛生根組培苗；其中，所述生根培養基為：以1/2MS為基本培養基，加入5-20％香蕉，0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L?6-芐氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并調整生根培養基的pH值為5.8-6.2；

步驟四、將流蘇石斛生根組培苗移栽至苗床上，待流蘇石斛小苗生長穩定，即可移栽至大棚。

優選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法中，步驟一所述流蘇石斛種子的預處理為，先將流蘇石斛碩果用80-85％乙醇溶液浸泡20-40秒，升汞消毒10-20分鐘，清洗干凈后切開流蘇石斛的碩果，得到預處理的流蘇石斛種子。

優選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法中，步驟四所述的苗床基質為：20-30樹皮、10-20雜木、20-30蛭石及10-15珍珠巖。

優選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養快速繁殖方法中，步驟四中將流蘇石斛生根組培苗移栽至苗床之前，先將流蘇石斛生根組培苗根部的培養基清洗干凈，晾干水汽，在移栽至苗床上。