[發明專利]一種酶標記仿生免疫分析檢測敵百蟲和乙酰甲胺磷的方法

有效

• 申請號: 201410669510.8
• 申請日: 2014-11-20
• 公開（公告）號: CN104330552A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 徐志祥;時辰;高繪菊
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種酶標記仿生免疫分析檢測敵百蟲和乙酰甲胺磷方法，其特征在于包括以下步驟：

1)多識別位點水相分子印跡膜的制備：4-8mL超純水、3-6mL二甲基亞砜和8-15mL乙腈的混合溶劑中分別加入摩爾比1:3:4-6的有機磷農藥通用半抗原4-(二甲氧基硫代磷酰胺基)丁酸、甲基丙烯酸和二甲基丙烯酸乙二醇酯，然后再向上述混合溶液中加入10-20mg偶氮二異丁腈，攪拌反應0.5-2h；96孔酶標板上每孔加入200μL攪拌反應后的混合溶液，氮氣保護條件下20-60℃聚合反應12-24h，用體積比3-9:1甲醇/冰乙酸溶液超聲洗脫4-10h，濃度100％甲醇溶液洗脫2-4h，干燥后得多識別位點水相印跡聚合物膜；

2)多殘留酶標記仿生免疫分析方法的建立：步驟1)制備的多識別位點水相印跡聚合物膜作為仿生抗體；4-(二甲氧基硫代磷酰胺基)丁酸酶標抗原標準溶液用磷酸鹽緩沖溶液PBS稀釋5000倍，作為酶標稀釋液；

將96孔酶標板第1行設為空白組，每孔只加200μL?PBS溶液；第2行設為對照組，每孔加100μL酶標稀釋液和100μLPBS溶液；第3-8行每孔依次分別加入敵百蟲或乙酰甲胺磷標樣梯度稀釋液和100μL酶標稀釋液；室溫孵育1h后用磷酸鹽吐溫緩沖液PBST洗板五次；96孔酶標板每孔加入100-200μL底物液，室溫下反應30-60min；每孔加入50-100μL?1.25mol/L硫酸，終止反應；用酶標儀讀取96孔酶標板第1-8行吸光度值A，分別計算抑制率；

以敵百蟲或乙酰甲胺磷標樣梯度稀釋液濃度的對數值為橫坐標，相應的抑制率百分數為縱坐標，分別敵百蟲和乙酰甲胺磷繪制標準曲線；

3)稱取1-2g待測樣品，粉碎后加入5-10mL?PBS溶液超聲提取3次，過濾得樣品提取液；將樣品提取液代替步驟2)中所述敵百蟲或乙酰甲胺磷標樣梯度稀釋液，重復步驟2)操作，根據抑制率由標準曲線計算出待測物中敵百蟲或乙酰甲胺磷的含量。