[發(fā)明專利]一種針對宮頸癌具有免疫原性的蛋白及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410666087.6 | 申請日： | 2014-11-19 |
| 公開（公告）號： | CN104371025B | 公開（公告）日： | 2017-11-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 焦新安;殷月蘭;段斐斐;潘志明;陳祥;孫林;黃金林 | 申請（專利權(quán)）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/74;C12N1/21;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/20;A61P35/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務所31219 | 代理人： | 許亦琳,余明偉 |
| 地址： | 225009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 針對 宮頸癌 具有 免疫原性 蛋白 及其 應用 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種針對宮頸癌具有免疫原性的融合蛋白及其應用。
背景技術(shù)
宮頸癌居于全球女性癌癥發(fā)病率的第二位，是重要的公共健康問題。全球每年新發(fā)宮頸癌病例約50萬，有27.3萬人死于宮頸癌，其中約85％死亡病例發(fā)生在發(fā)展中國家，中國每年新增宮頸癌病例約有13.5萬，占全球新發(fā)病例的1/3，因此中國也是宮頸癌高發(fā)國之一。當前，人乳頭瘤病毒(HPV)已被證實是引起宮頸癌的主要病原，至少在99％宮頸癌患者組織內(nèi)檢測到HPV DNA。
依據(jù)HPV的致癌危險性，分類為低危型和高危型。高度致癌危險的病毒主要包括HPV16、18、26、31、33、35、45、51、52、56、66等亞型，通常在高度鱗狀上皮內(nèi)病變(CIN2～3)中發(fā)現(xiàn)。其中HPV16、18可在絕大多數(shù)宮頸癌中發(fā)現(xiàn)，并且50％以上的宮頸癌患者由HPV16引起。2008年6月，歷時5年的《中國婦女人乳頭瘤病毒感染和宮頸癌流行病學調(diào)查》結(jié)果顯示，HPV16和HPV18是導致中國婦女患子宮頸癌的最主要類型。
E7蛋白可以抑制Rb(retinoblastoma gene)的抑癌功能，從而以多種方式擾亂正常細胞周期，引起細胞周期的失控，導致細胞的過度增殖，細胞轉(zhuǎn)化及惡變。E7是維持細胞轉(zhuǎn)化和惡性癌變所必需的，因此E7常作為HPV血清學診斷抗原和宮頸癌治療性疫苗研究的靶抗原。
單核細胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一種宿主譜廣泛的兼性胞內(nèi)菌。LM被巨噬細胞和其它吞噬細胞吞噬后，既能存在于吞噬體內(nèi)，又能定居在細胞胞漿中，使LM運送的外源抗原可以同時進入MHCⅠ類和MHCⅡ類抗原提呈途徑，從而誘導強烈的CD4+T細胞和CD8+T細胞免疫應答。這種獨特的胞內(nèi)生活史，使單增李斯特菌成為研究宿主和細菌相互作用及宿主免疫應答的模式細菌，尤其誘導強烈的CD8+T細胞免疫應答，其作為傳染性疾病和腫瘤疾病疫苗載體具有廣闊應用前景。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種具有宮頸癌免疫原性的融合蛋白及其應用。
本發(fā)明提供了一種針對宮頸癌具有免疫原性的融合蛋白，為在減毒重組李斯特菌中分泌表達的HPV16 E7的融合蛋白。
所述融合蛋白具體為單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO與HPV16 E7的融合蛋白。
所述HPV16 E7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
所述單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
所述減毒重組李斯特菌包含編碼HPV16 E7蛋白的多核苷酸，所述編碼HPV16 E7蛋白的多核苷酸序列為SEQ ID NO.6。
所述融合蛋白中，密碼子優(yōu)化的HPV16 E7蛋白插入于前述單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO的第37位和第38位氨基酸殘基之間。
進一步的，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
所述融合蛋白針對宮頸癌具有較強的免疫原性。
本發(fā)明第二方面提供了一種多核苷酸，其編碼所述融合蛋白。
本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。
進一步的，所述多核苷酸中，編碼HPV16 E7的基因序列為SEQ ID NO.6。
所述多核苷酸可用于構(gòu)建HPV16 E7的表達載體，并進一步構(gòu)建表達HPV16 E7的宿主細胞。
本發(fā)明第三方面提供了一種載體，其含有所述多核苷酸。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建所述載體。這些方法包括重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)等。可將編碼所述融合蛋白的DNA有效連接到載體中的多克隆位點上，以指導mRNA合成進而表達蛋白，或者用于同源重組。
較佳的，所述載體為原核載體或穿梭質(zhì)粒，如原核載體pMD-20T、穿梭質(zhì)粒pKSV7等。
本發(fā)明第四方面提供了一種宿主細胞，其被所述載體所轉(zhuǎn)化。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于揚州大學，未經(jīng)揚州大學許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201410666087.6/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
