[發明專利]一種針對宮頸癌具有免疫原性的蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201410666087.6
• 申請日: 2014-11-19
• 公開（公告）號: CN104371025B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 焦新安;殷月蘭;段斐斐;潘志明;陳祥;孫林;黃金林
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/74;C12N1/21;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/20;A61P35/00;C12R1/01
• 代理公司: 上海光華專利事務所31219
• 代理人: 許亦琳,余明偉

1.一種多核苷酸，其編碼一種針對宮頸癌具有免疫原性的融合蛋白，所述融合蛋白為在減毒重組李斯特菌中分泌表達的HPV16E7的融合蛋白，所述融合蛋白為單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO與HPV16E7的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述多核苷酸中編碼HPV16E7的基因序列為SEQ ID NO.6。

2.一種載體，其含有權利要求1所述多核苷酸。

3.一種宿主細胞，其被權利要求2所述載體轉化。

4.如權利要求3所述宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為單核細胞增生性李斯特細菌。

5.如權利要求4所述宿主細胞，其特征在于，所述單核細胞增生性李斯特細菌的血清型為1/2a。

6.一種重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌，所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌的基因組中，野生型的hly編碼基因被替換成了氨基酸序列為SEQ ID NO.3的融合蛋白的編碼基因，所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌能融合表達單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO與HPV16E7的融合蛋白，所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌的基因組中編碼所述融合蛋白的編碼基因為權利要求1所述的多核苷酸。

7.如權利要求6所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌，其特征在于，所述單核細胞增生性李斯特細菌的血清型為1/2a。

8.如權利要求6所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌，其特征在于，所述單核細胞增生性李斯特細菌為單核細胞增生李斯特菌株yzuLM4。

9.如權利要求6-8任一所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌的構建方法，包括下列步驟：

1)合成HPV16E7蛋白編碼基因片段；從單核細胞增生李斯特菌株中擴增出待插入位點的上游同源臂片段hlya和下游同源臂片段hlyb；

2)將步驟1)獲得的HPV16E7編碼基因及上下游同源臂片段拼接成hlya-HPV16E7-hlyb融合片段并連接入穿梭質粒獲得重組穿梭質粒；

3)將步驟2)獲得的重組穿梭質粒轉化單核細胞增生性李斯特細菌,經過抗性和溫度雙壓力篩選，再通過無抗性傳代得到無抗性基因的重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌。

10.權利要求6-8任一所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌在制備宮頸癌疾病疫苗上的用途。

11.一種疫苗，包括權利要求6-8任一所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌。