[發明專利]一種低粘度、高純度酵母甘露聚糖的制備方法

有效

• 申請號: 201410665920.5
• 申請日: 2014-11-19
• 公開（公告）號: CN104403017A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 王強;劉紅芝;李亞楠;石愛民;劉麗;胡暉;林偉靜
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農產品加工研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及酵母甘露聚糖的制備，具體地說，涉及一種低粘度、高純度酵母甘露聚糖的制備方法。

背景技術

酵母甘露聚糖是酵母細胞壁多糖的一種，約占酵母細胞壁干重的40％，由主鏈和側鏈構成，主鏈由多個甘露糖分子以α-1,6鍵連接形成，主鏈上連接有以α-1,2或α-1,3鍵連接的甘露糖側鏈，它通過O-糖肽鍵和N-糖肽鍵與蛋白質連在一起，由5％～20％蛋白質、80％～90％的甘露糖組成其分子質量約為20KDa～200KDa。甘露聚糖具有多種免疫學功能，可以調節腸道菌群平衡、增強免疫、結合或者吸附霉菌毒素、抗氧化等，具有廣闊的應用前景。

酵母甘露聚糖在酵母細胞壁中以共價鍵形式與蛋白質相連，粗提取得到的甘露聚糖含有較多的蛋白質，純度較低，采用適當的方法降低蛋白質含量是制備高純度酵母甘露聚糖的關鍵，目前，除蛋白的方法主要有：Sevage法、三氯乙酸法和氯化鈣法等，然而，這些方法存在如下問題：蛋白去除率高而多糖保留率低、有機溶劑引入和殘留、水相體系不適用，不利于酵母甘露聚糖純度的提升。

國內市場的酵母甘露聚糖主要為含量20％～50％的規格，價格較低，且低純度限制了酵母甘露聚糖的廣泛應用，因此，研究開發一種提高酵母甘露聚糖純度的方法，對于提高酵母甘露聚糖產品附加值，滿足市場需求具有重要的經濟效益和社會效益。

多糖溶液的流變特性對于被應用的食品來說至關重要，會直接影響到該食品的感官品質，所以在開發食品要選擇一種膠體時，該膠體的流變特性是需要首先考慮的因素。不同純度的酵母甘露聚糖，其粘度差別較大，對應用體系的影響不同，如何做到不改變體系流變學性質，而又能夠發揮酵母甘露聚糖的功能特性就顯得至關重要。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種高純度酵母甘露聚糖的制備方法。

為了實現本發明目的，本發明的技術方案如下：

一種低粘度、高純度酵母甘露聚糖的制備方法，以釀酒酵母細胞壁為原料，采用水提醇沉法，得到粗品酵母甘露聚糖，先經中性蛋白酶酶解，并在磷酸緩沖液保護下，進行鏈霉蛋白酶酶解并多次離心，再加工即得。

本發明技術方案所得的低粘度、高純度酵母甘露聚糖產品為白色松軟的棉絮狀固形物。

進一步地，所述制備方法具體包括如下步驟：

(1)以釀酒酵母細胞壁為原料，采用水提醇沉法，得到粗品酵母甘露聚糖Ⅰ(純度在80％以下)；

(2)采用去離子水，將步驟(1)所得粗品酵母甘露聚糖配制成溶液；

(3)向步驟(2)所得溶液中加入中性蛋白酶neutrase，進行酶解，酶解結束后，進行滅酶，得粗品酵母甘露聚糖的一次酶解液；

(4)將步驟(3)所得的一次酶解液進行離心處理；

(5)取步驟(4)所得上清，加入乙醇進行醇沉，離心收集沉淀，得粗品酵母甘露聚糖Ⅱ；

(6)取步驟(5)所得沉淀，加入磷酸鹽緩沖液配制成溶液，采用NaOH調節溶液pH值至7.5～8.0；

(7)取步驟(6)所得溶液，加入鏈霉蛋白酶，進行酶解，酶解結束后，進行滅酶，得粗品酵母甘露聚糖的二次酶解液；

(8)將步驟(7)所得二次酶解液進行離心處理；

(9)取步驟(8)所得上清，加入乙醇進行醇沉，離心收集沉淀；

(10)將步驟(9)所得沉淀采用去離子溶解，攪拌均勻至分散完全，將所述溶液采用超濾除鹽，收集所得截留液；

(11)將步驟(10)所得的截留液進行噴霧干燥，即得低粘度、高純度酵母甘露聚糖Ⅲ。

其中，所述步驟(1)中，采用熱水浸提法提取粗品酵母甘露聚糖。

其中，所述步驟(2)中，采用去離子水，將步驟(1)所得粗品酵母甘露聚糖配制成15％w/v的溶液。

其中，所述步驟(3)中，中性蛋白酶的添加量為粗品酵母甘露聚糖中蛋白含量的0.05％，酶解溫度為45℃，酶解時間為2h。

其中，所述步驟(4)中，離心轉速為4000～5000rpm，離心時間為5～10min。

其中，所述步驟(5)中，乙醇的用量為所得上清的二倍體積，離心轉速為4000～5000rpm，離心時間為10～20min。

其中，所述步驟(6)中，所述溶液濃度為15％w/v，磷酸鹽緩沖液的濃度為0.02M～0.2M，pH為7.0；NaOH濃度為0.01M。

其中，所述步驟(7)中，鏈霉蛋白酶的添加量為粗品酵母甘露聚糖中蛋白含量的0.05％，酶解溫度為40℃，酶解時間為8h。