[發明專利]復合菌劑及所采用的復合微生物的連續發酵法有效

申請號：	201410662273.2	申請日：	2014-11-19
公開（公告）號：	CN104371960A	公開（公告）日：	2015-02-25
發明（設計）人：	劉金松;曾新福;楊彩梅;汪以真;馮杰	申請（專利權）人：	浙江惠嘉生物科技有限公司;浙江大學
主分類號：	C12N1/20	分類號：	C12N1/20;C12R1/10;C12R1/125;C12R1/145
代理公司：	杭州中成專利事務所有限公司 33212	代理人：	金祺
地址：	浙江省湖州市***	國省代碼：	浙江;33
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摘要：
搜索關鍵詞：	復合采用微生物連續發酵
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于微生物發酵領域，涉及一種復合微生物的發酵工藝——丁酸梭菌、地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的分段連續發酵工藝。?

背景技術

丁酸梭菌是一種厭氧的革蘭氏陽性芽孢桿菌，由于其嚴格厭氧，在發酵環境中如有氧氣存在，丁酸梭菌菌體將不會生長甚至死亡。丁酸梭菌耐熱、耐酸、耐膽汁，且對多種飼用抗生素有較強的耐受性，可配伍使用；可產生淀粉酶，水解淀粉和糖類；產生丁酸、醋酸和乳酸等代謝產物。其在臨床上已被廣泛應用于治療消化、小兒等各種原因引起的腸道菌群紊亂、急慢性腹瀉、腸應激綜合征、抗生素相關性腸炎等各種腸道疾病，且在日本、韓國等地作為飼料添加劑應用于畜禽養殖上也取得了很好的效果，對于減少當前飼料中抗生素產品的濫用、減少藥物在肉品中的殘留、降低動物細菌的耐藥性和保障動物健康方面有著重要的意義，是一種理想的、具有廣闊開發前景的微生態制劑。?

地衣芽孢桿菌是一種兼性厭氧的微生物，其在有氧無氧條件下均可生長，進入動物胃腸道后在生長繁殖過程中可以消耗腸內氧氣，維持腸道厭氧環境，促進腸道有益菌如雙歧桿菌和乳酸菌的增殖和發育，防止病原菌及腐敗菌在腸道內的異常增殖，從而調節動物腸道微生態平衡。地衣芽孢桿菌能形成孢子，而且能耐高溫(100℃)、耐酸堿、耐擠壓和耐溫度變化等，能滿足生產加工特性，在飼料中應用具有良好的生產性能。我國對地衣芽孢桿菌的應用開發起步較晚，因此導致目前市場上雖有一些地衣芽孢桿菌產品，但其有效活菌數低、生產工藝復雜且成本較高，而且產品質量參差不齊，影響了其使用效果。?

枯草芽孢桿菌是好氧的微生物，在有氧條件下生長，進入動物胃腸道后能迅速消耗消化道內的游離氧，形成腸道低氧環境，促進有益厭氧菌生長，并產生乳酸等有機酸類，降低腸道pH值，間接抑制其它致病菌的生長。枯草芽孢桿菌菌體能自身合成消化性酶類，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，在消化道中與內源酶共同發揮作用，提高飼料消化率。同時枯草芽孢桿菌在繁殖過程中能合成多種維生素，提高動物體內干擾素和巨噬細胞的活性。具有產酶量高、抑菌能力強、安全性好、環保等優點。此外，枯草芽孢桿菌具有耐酸、耐鹽、耐高溫(100℃)及耐擠壓的特性，在飼料加工中保存良好，有利于推廣應用。其作為極具開發潛力的微生物菌種已廣泛應用于工業、農業、醫藥衛生、食品、畜牧業、水產及科研諸領域。?

上述益生菌的單獨發酵菌面臨的發酵成本高、活菌數低、雜菌多等問題，而國內外對三聯發酵技術尚未見報道。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種復合微生物的聯系發酵新工藝，克服微生物單獨發酵過程中滅菌次數多，進料次數多的缺點，簡化發酵程序，降低微生物發酵的生產成本，同時通過連續發酵中和不同微生物的協同作用，提高活菌數、降低雜菌數，提高微生物的作用效果。?

為了解決上述技術問題，本發明提供一種復合微生物的連續發酵法，包括以下步驟：?

1)、分別制備枯草芽孢桿菌菌液、地衣芽孢桿菌菌液和丁酸梭菌菌液；?

2)、將發酵罐內加入15噸培養基Ⅲ作為基礎發酵液；?

3)、控制基礎發酵液的溫度為36～38℃，控制罐壓0.01Mpa，投入140～160L的枯草芽孢桿菌液于36～38℃的溫度、750～850m³/h的通氣量、攪拌條件下發酵培養11～13h(較佳為12h)；?

然后，投入140～160L的地衣芽孢桿菌菌液于36～38℃的溫度、750～850m³/h的通氣量、攪拌條件下繼續發酵培養15～17h(較佳為16h)；?

接著，停止攪拌和通氣，于36～38℃的溫度下繼續發酵培養2h；?

最后，投入140～160L的丁酸梭菌菌液于36～38℃的溫度靜置厭氧發酵培養23～25h(較佳為24h)；?

4)、步驟3)所得的發酵液過濾后離心濃縮至原體積的28～32％；然后經噴霧干燥，得復合益生菌制劑。?

作為本發明的復合微生物的連續發酵法的改進：?