[發明專利]一種豬圓環病毒2型滅活凍干疫苗的制備方法有效
| 申請號: | 201410659949.2 | 申請日: | 2014-11-18 |
| 公開(公告)號: | CN104383527A | 公開(公告)日: | 2015-03-04 |
| 發明(設計)人: | 唐榮宏;呂茂杰;李亞杰;楊保收;梁武 | 申請(專利權)人: | 天津瑞普生物技術股份有限公司 |
| 主分類號: | A61K39/12 | 分類號: | A61K39/12;A61K9/19;A61K47/42;A61P31/20 |
| 代理公司: | 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211 | 代理人: | 楊慧玲 |
| 地址: | 300308 天津市濱海新區空港*** | 國省代碼: | 天津;12 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 種豬 圓環 病毒 型滅活凍干 疫苗 制備 方法 | ||
1.一種豬圓環病毒2型滅活凍干疫苗的制備方法,其特征在于包括以下步驟:
1)取豬圓環病毒2型病毒培養液進行澄清處理,得到病毒液;
2)對步驟1)得到的病毒液進行超濾濃縮;
3)使用分子篩層析柱對步驟2)濃縮后的病毒液進行純化;
4)利用β-丙內酯對步驟3)純化后的毒液進行滅活;
5)對步驟4)滅活后的病毒液實施凍干、制劑。
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟1)所述澄清處理包括以下步驟:對病毒培養液先用6~10層紗布過濾,再用0.5~2μm的雙層濾膜進行過濾。
3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟2)所述濃縮的倍數為20~50倍。
4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟2)所述超濾是切向流超濾。
5.根據權利要求4所述的方法,其特征在于步驟2)所用濾膜的孔徑為30~50K。
6.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟3)所述分子篩層析柱所用的層析樹脂選自Sepharose?4?Fast?Flow、Sepharose?6?Fast?Flow、Sepharose?CL-2B或Sepharose?CL-4B的其中一種。
7.根據權利要求5所述的方法,其特征在于步驟3)利用柱層析純化時,按柱體積的5~8%(v/v)上樣。
8.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟3)純化后的病毒液中病毒效價≥108.5TCID50/ml,總蛋白濃度≤300ug/mL。
9.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟4)所述滅活包括以下步驟:取β-丙內酯稀釋700~900倍,將稀釋后的β-丙內酯溶液以1:(3~8)(v/v)的比例加入到步驟3)純化后的病毒液中,滅活1~3h。
10.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟5)實施凍干時,所用凍干保護劑是由以下重量百分數的成分組成的:
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