[發(fā)明專利]黃瓜AG-like基因CsMADS24基因過表達載體及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410659872.9 | 申請日： | 2014-11-19 |
| 公開（公告）號： | CN104450736A | 公開（公告）日： | 2015-03-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡麗芳;劉世強;賀浩華;楊寅桂;蔣倫偉;王義華 | 申請（專利權(quán)）人： | 江西農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00 |
| 代理公司： | 南昌洪達專利事務(wù)所 36111 | 代理人： | 劉凌峰 |
| 地址： | 330045 江西省南*** | 國省代碼： | 江西;36 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 黃瓜 ag like 基因 csmads24 表達 載體 及其 應(yīng)用 | ||
1.黃瓜CsMADS24基因，其特征在于，其核苷酸序列為如SEQ?ID?NO1所示。
2.一種黃瓜CsMADS24基因花特異表達載體，其特征在于，植物表達載體為PHB-CsMADS24，其含有黃瓜AG-like基因CsMADS24，基因的上游連有雙35S啟動子。
3.一種黃瓜CsMADS24基因花特異表達載體，其特征在于，由下述方法構(gòu)建而成：
根據(jù)CuGI上登錄號為Csa017355的CsMADS24序列設(shè)計兩端引物，其中CsMADS24-F引物引入了PstI位點,CsMADS24-R引物引入了XbaI位點：CsMADS24-F：5’-aaaaCTGCAGATGAGTTGTTATGAGGAAG-3’，??CsMADS24-R：5’-?aaaaTCTAGATTACACAAGTTGAAGAGAG-3’,以黃瓜花蕾的cDNA第一鏈為模板進行PCR擴增，獲得CsMADS24全長；
回收CsMADS24的cDNA全長，將其連接到pMD18載體上，采用堿裂解法提取質(zhì)粒DNA，通過PCR檢測和酶切檢測獲得重組質(zhì)粒pMD18-CsMADS24；
（3）使用PstI和XbaI酶切pMD18-CsMADS24，回收CsMADS24片段，同時用PstI和XbaI酶切PHB，回收后連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，獲得植物表達載體PHB-CsMADS24。
4.如權(quán)利要求3所述黃瓜CsMADS24基因花特異表達載體的應(yīng)用，其特征在于，將獲得的植物表達載體PHB-CsMADS24轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101，再轉(zhuǎn)入到擬南芥中，成熟后收獲植株的種子，晾干后通過潮霉素篩選獲得抗性苗，再通過PCR鑒定和RT-PCR檢測后獲得轉(zhuǎn)基因植株。
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