[發明專利]黃瓜AG-like基因CsMADS24基因過表達載體及其應用

在審

• 申請號: 201410659872.9
• 申請日: 2014-11-19
• 公開（公告）號: CN104450736A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 胡麗芳;劉世強;賀浩華;楊寅桂;蔣倫偉;王義華
• 申請（專利權）人: 江西農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.黃瓜CsMADS24基因，其特征在于，其核苷酸序列為如SEQ?ID?NO1所示。

2.一種黃瓜CsMADS24基因花特異表達載體，其特征在于，植物表達載體為PHB-CsMADS24，其含有黃瓜AG-like基因CsMADS24，基因的上游連有雙35S啟動子。

3.一種黃瓜CsMADS24基因花特異表達載體，其特征在于，由下述方法構建而成：

根據CuGI上登錄號為Csa017355的CsMADS24序列設計兩端引物，其中CsMADS24-F引物引入了PstI位點,CsMADS24-R引物引入了XbaI位點：CsMADS24-F：5’-aaaaCTGCAGATGAGTTGTTATGAGGAAG-3’，??CsMADS24-R：5’-?aaaaTCTAGATTACACAAGTTGAAGAGAG-3’,以黃瓜花蕾的cDNA第一鏈為模板進行PCR擴增，獲得CsMADS24全長；

回收CsMADS24的cDNA全長，將其連接到pMD18載體上，采用堿裂解法提取質粒DNA，通過PCR檢測和酶切檢測獲得重組質粒pMD18-CsMADS24；

（3）使用PstI和XbaI酶切pMD18-CsMADS24，回收CsMADS24片段，同時用PstI和XbaI酶切PHB，回收后連接，轉化感受態細胞，獲得植物表達載體PHB-CsMADS24。

4.如權利要求3所述黃瓜CsMADS24基因花特異表達載體的應用，其特征在于，將獲得的植物表達載體PHB-CsMADS24轉入農桿菌GV3101，再轉入到擬南芥中，成熟后收獲植株的種子，晾干后通過潮霉素篩選獲得抗性苗，再通過PCR鑒定和RT-PCR檢測后獲得轉基因植株。