[發明專利]一種棘白菌素B微生物酶轉化方法有效
| 申請號： | 201410657837.3 | 申請日： | 2014-11-19 |
| 公開（公告）號： | CN105648000B | 公開（公告）日： | 2019-08-13 |
| 發明（設計）人： | 別一;郭明;袁建棟 | 申請（專利權）人： | 重慶乾泰生物醫藥有限公司 |
| 主分類號： | C12P21/04 | 分類號： | C12P21/04;C12R1/47 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 400700 重慶市北碚區城*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 菌素 微生物 轉化 方法 | ||
1.將棘白菌素B轉化成棘白菌素B母核的方法，包括以下步驟：
1)、發酵能將棘白菌素B脫酰酶表達在胞外的基因工程菌，獲得棘白菌素B脫酰酶；
2)、發酵完成后，將發酵液過濾或離心，得到上清液，向上清液中加入上清液體積的40％～80％(w/v)重量的非重金屬鹽，攪拌2～8小時，過濾或離心收集沉淀，得到粗酶；
3)、將棘白菌素B溶于甲醇、乙醇或二甲亞砜中，得到質量濃度為5～15％的棘白菌素B溶液；
4)、將步驟3)制備的棘白菌素B溶液和步驟2)制備的粗酶分別分批加入到磷酸鹽緩沖液中，攪拌，使棘白菌素B轉化為棘白菌素B母核，監測轉化體系中棘白菌素B及棘白菌素B母核濃度，當棘白菌素B濃度不再減少，棘白菌素B母核濃度不再增加時，結束轉化，
其中，步驟4)加入到磷酸鹽緩沖溶液中的棘白菌素B的初始量為反應溶液體積的0.1％～0.4％(w/v)；加入到磷酸鹽緩沖溶液中粗酶的初始量為轉化反應溶液體積的1％～4％(w/v)。
2.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟2)所述的非重金屬鹽為硫酸銨。
3.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟4)所述磷酸鹽緩沖液濃度為0.05～0.15M。
4.如權利要求3所述方法，其特征在于，步驟4)所述磷酸鹽緩沖溶液用鹽酸調節pH至5.5～6.5。
5.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟4)分批添加粗酶次數為3～6次，每次間隔2～8小時，每次添加量為轉化反應溶液體積的1％～4％(w/v)。
6.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟4)分批添加棘白菌素B溶液次數為2～5次，每次間隔2～8小時，每次添加量以棘白菌素B計算相當于轉化反應溶液體積的0.1％～0.4％(w/v)。
7.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟4)轉化過程中采用HPLC監測轉化體系中棘白菌素B及棘白菌素B母核濃度。
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