[發明專利]一步法反轉錄PCR檢測和分型埃博拉病毒5種亞型的引物、探針及試劑盒有效
| 申請號： | 201410655921.1 | 申請日： | 2014-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN104313191A | 公開（公告）日： | 2015-01-28 |
| 發明（設計）人： | 王成明;陸光武;張繼壘 | 申請（專利權）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南京鐘山專利代理有限公司 32252 | 代理人： | 戴朝榮 |
| 地址： | 225009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一步法 轉錄 pcr 檢測 分型埃博拉 病毒 種亞型 引物 探針 試劑盒 | ||
1.一種一步法反轉錄PCR檢測和分型埃博拉病毒5種亞型的引物、探針，其特征在于：其核苷酸序列如下：
上游引物：5’-CGGACACACAAAAAGAAAGAAG-3’
6-FAM探針:5’-6FAM-TAGTTAYTCGCACACAAWARRK-磷酸-3’
LCRed640探針:5’-GAGGAAAATTDTTAATCTTCCTC-LCRed640-3’
Z-下游引物(EBOV扎伊爾型)：5’-GAACTTGTGATGTGATAAGACCTA-3’
S-下游引物(EBOV蘇丹型)：5’-AAAGGCAAAGCAATACGACC-3’
R-下游引物(EBOV萊斯頓型)：5’-CATGTTGATGGTAATTGGTAATAG-3’
T-下游引物(EBOV塔伊森林型)：5’-GGAATGGGGTACTTCTGAACA-3’
B-下游引物(EBOV本迪布焦型)：5’-GCCAATTCTCAGTGTTGGTATT-3’。
2.一種一步法反轉錄PCR檢測和分型埃博拉病毒5種亞型的試劑盒，其特征在于：包括樣品DNA模板或者定量標準試劑、PCR緩沖液、FRET-上游引物、FRET-下游引物、的6-FAM探針、LCRed640探針、商業化Taq酶、dNTP、商業化反轉錄酶、商業化RNA酶抑制劑。
3.一種一步法反轉錄PCR檢測和分型埃博拉病毒5種亞型的方法，其特征在于：用權利要求1所述的引物和探針，特異地擴增埃博拉5種亞型的核酸，埃博拉5種亞型分別為扎伊爾型、蘇丹型、萊斯頓型、塔伊森林型和本迪布焦型，并可依據其高分辨率熔解曲線或瓊脂糖凝膠電泳中目的條帶大小的不同區分5種亞型的埃博拉病毒。
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