[發明專利]依魯替尼及其異構體的檢測方法

有效

• 申請號: 201410655552.6
• 申請日: 2014-11-17
• 公開（公告）號: CN104407067A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 藍英;姚博;楊鳳智;肖毅
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;楊晞

技術領域

本發明屬于制藥技術領域，具體涉及依魯替尼及其異構體雜質的一種高效液相分離檢測方法。

背景技術

依魯替尼(Ibrutinib)，化學名為1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-2-丙烯-1-酮，其結構如式(1)所示；是一種不可逆的布魯頓酪氨酸激酶(BTK，Bruton's?tyrosine?kinase)抑制劑，能夠抑制惡性B細胞的增殖、生存，可用于治療慢性淋巴細胞白血病(CLL)和小細胞淋巴細胞淋巴瘤等疾病：

依魯替尼結構中存在一個手性碳，具有一個對映異構體雜質，在檢測依魯替尼過程中，依魯替尼與其對映異構體雜質難以分離、檢測。

發明內容

發明概述

本發明提供了一種簡便、有效的HPLC檢測分離依魯替尼及其對映異構體雜質的方法。

本發明人通過多次試驗嘗試，篩選色譜柱和相適應的流動相、流速、柱溫等檢測條件，得到一種適用于依魯替尼、其對映異構體雜質的分離檢測方法。最終發現采用AD-H，4.6mm?X?250mm，5μm，色譜柱為分離色譜柱，以正已烷、乙醇為流動相，可以將依魯替尼及其對映異構體雜質進行有效分離檢測。

術語定義

術語“分離度”是指HPLC檢測中，相鄰色譜峰保留時間之差與兩色譜峰峰寬均值之比。

發明詳述

發明人通過研究，開發了一種分離、檢測依魯替尼、其對映異構體雜質的方法，通過使用特定的色譜柱及控制其它檢測條件，能夠有效地分離依魯替尼及其對映異構體雜質。

一種分離檢測依魯替尼的方法，其包括：在高效液相色譜儀上進行檢測，色譜柱為AD-H，4.6mm?X?250mm,5μm，手性色譜柱；流動相為烷烴溶劑和醇溶劑的混合溶劑，烷烴溶劑與醇溶劑的體積比為35:65；柱溫為25℃-40℃；流速為0.3mL/min-0.9mL/min。

發明人曾嘗試使用IC，4.6mm?X?250mm,5μm，手性色譜柱，CHIRALPAK?AS-H，4.6mm?X?250mm,5μm手性色譜柱，OD-H，4.6mm?X?250mm,5μm，手性色譜柱，OJ-H，4.6mm?X?250mm,5μm，手性色譜柱等為分析色譜柱，使用烷烴溶劑和醇溶劑的混合溶劑對供試品進行分析檢測，結果顯示上述色譜柱對供試品中的依魯替尼及其對應異構體的分離效果較差，分離度低，并且峰寬比較大，靈敏度相對比較差，在調節烷烴溶劑和醇溶劑的比例亦不能很好的改善分離度和靈敏度；而AD-H，4.6mm?X?250mm，5μm色譜柱的分離效果較好。

發明人還發現，除色譜柱的選擇性之外，烷烴溶劑和醇溶劑的比例對依魯替尼及其對映異構體的分離檢測有較大的影響，醇溶劑的比例過低，低至40％時(即烷烴：醇＝60:40，V/V)，色譜峰出峰時間過慢且峰形不佳，不適于分析檢測供試品；發明人經過多次嘗試，發現將烷烴溶劑與醇溶劑的體積比定為35:65，有利于依魯替尼及其對應異構體的分離檢測。

在檢測前，需將待檢測的樣品用稀釋劑稀釋。所述稀釋劑為烷烴溶劑和醇溶劑的混合溶劑，稀釋劑中烷烴溶劑與醇溶劑的體積比為45:55-75:25。在檢測進樣前，可將樣品用稀釋劑配制成0.3mg/mL-5mg/mL的溶液，然后進樣檢測。

所述烷烴溶劑為正己烷，正庚烷，正戊烷，或其組合。所述醇溶劑為乙醇，異丙醇，正丙醇，或其組合。

所述檢測方法中，可使用的檢測器有紫外檢測器，檢測波長為230nm-270nm。

所述檢測方法中，樣品的進樣量為1μL-100μL；運行時間為40min-50min。

在一些實施方式中，所述流動相為正己烷和乙醇，正己烷和乙醇的體積比為35:65。

在一些實施方式中，稀釋劑為正己烷和乙醇，正己烷和乙醇的體積比為50:50。

在一些實施方式中，柱溫為35℃。

在一些實施方式中，流速為0.5mL/min。

在一些實施方式中，一種分離檢測依魯替尼的方法，其包括：在高效液相色譜儀上進行檢測，色譜柱為AD-H，4.6mm?X?250mm，5μm，手性色譜柱；流動相為正己烷和乙醇的混合溶劑，正己烷和乙醇的體積比為35:65；柱溫為35℃；流速為0.5mL/min；稀釋劑為正己烷和乙醇，正己烷和乙醇的體積比為50:50；進樣量為10μL。