[發明專利]一種前交叉韌帶殘端來源的間充質干細胞的制備方法在審
| 申請號： | 201410654515.3 | 申請日： | 2014-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN104357386A | 公開（公告）日： | 2015-02-18 |
| 發明（設計）人： | 付維力 | 申請（專利權）人： | 四川大學華西醫院 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 610041 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 交叉 韌帶 來源 間充質 干細胞 制備 方法 | ||
1.一種前交叉韌帶殘端組織來源的間充質干細胞的分離方法，其特征在于：包括如下步驟：
(1)取前交叉韌帶殘端組織，剪成組織碎塊，采用濃度為0.2～0.6％(w/v)的I型膠原酶溶液消化4～6h；
(2)終止消化，用100～400目篩網過濾，1000～2000rpm離心4～10min，棄上清，PBS洗滌3次，重懸于間充質干細胞培養基中，置于37℃、5％CO2條件下培養，2～3天后棄去非貼壁細胞和碎片，換液，此后每3～4天換液一次，在細胞融合度為80％～90％時收獲細胞，即可。
2.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(1)中，所述組織碎塊的體積為1～5mm3。
3.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(1)中，所述消化是在37℃、30～300轉/分條件下振蕩消化。
4.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(1)中，所述I型膠原酶溶液的濃度為0.2％(w/v)；所述I型膠原酶溶液是包含膠原酶的低糖DMEM培養基。
5.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(2)中，所述終止消化的方法是：加入細胞懸液1/2～3倍體積的含10％FBS的低糖DMEM培養基。
6.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(2)中，所述篩網為200目篩。
7.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(2)中，所述離心的轉速為1200rpm，離心時間為5min。
8.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(2)中，細胞培養時，環境的相對濕度為95％。
9.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于：步驟(2)中，所述間充質干細胞培養基是添加有10％FBS，3.7g/L?NaHCO3，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素，25ng/ml兩性霉素B，2mM?L-谷氨酰胺的低糖DMEM培養基。
10.權利要求1～9任意一項方法分離得到的間充質干細胞。
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