[發明專利]蛋白產品中游離核酸水解物的測定方法及生產工藝對核苷酸破壞程度的評價方法

有效

• 申請號: 201410652446.2
• 申請日: 2014-11-17
• 公開（公告）號: CN104515817A
• 公開（公告）日: 2015-04-15
• 發明（設計）人: 許建剛
• 申請（專利權）人: 上海征泰飼料有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 劉菁菁

技術領域

本發明屬于核酸水解物測定技術領域，尤其屬于單細胞蛋白生產質量控制領域。

背景技術

單細胞蛋白(Single?cell?protein簡稱SCP)又稱微生物蛋白或菌體蛋白，是利用工業廢水、廢氣、天然氣、石油烷烴類、農副加工產品以及有機垃圾等作為培養基，培養酵母、非病源性細菌、微型菌、真菌等單細胞生物體，然后經過凈化干燥處理后制成，是食品工業和飼料工業重要的蛋白質來源。

單細胞蛋白產品含有豐富的核苷酸，市場上酵母類的產品是飼料工業主要的核苷酸提供者。由于工藝特點的原因，自溶酵母、酶解酵母、水解酵母等產品含有較多游離態的核酸水解物，研究發現現有很多酵母產品既含有游離核苷酸，也含有較高含量的堿基。游離核苷酸能被動物快速吸收，發揮重要生理功能，堿基則會對動物肝臟腎臟造成不良影響。堿基含量過多意味著生產過程當中有重要營養價值的核苷酸被酶解、水解或微生物代謝。這會造成酵母產品的質量下降，提供的核苷酸含量降低，進而能為動物提供免疫功能的作用減少，同時增加的堿基如腺嘌呤則會對動物造成毒性。

判斷單細胞蛋白的生產工藝對核苷酸的破壞程度，開發既能反應工藝條件的優劣又能為產品質量控制提供科學的、反映營養價值的評估方法就變得極為重要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種測定單細胞蛋白中游離核酸含量的方法。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：蛋白產品中游離核酸水解物的測定方法，其特征在于采用以下步驟：

(1)分別制備核苷酸混合標準液及堿基混合標準液，

(2)配制待測樣品的溶液，以步驟1所述的核苷酸混合標準液及堿基混合標準液作為參照液，采用高效液相色譜法通過洗出峰面積比較得到樣品中游離核苷酸及游離堿基的含量值。

所述核苷酸混合標準液是通過分別量取尿苷酸標準儲備液2.0ml、腺苷酸標準儲備液2.0ml、鳥苷酸二鈉標準儲備液2.0ml、胞苷酸標準儲備液2.0ml、肌苷酸標準儲備液2.0ml、鳥苷標準儲備液1.0ml、腺苷標準儲備液1.0ml、尿苷標準儲備液1.0ml、肌苷標準儲備液1.0ml、胞苷標準儲備液1.0ml至100ml容量瓶內，加水定容至100ml，

所述尿苷酸標準儲備液、腺苷酸標準儲備液、鳥苷酸二鈉標準儲備液、胞苷酸標準儲備液、肌苷酸標準儲備液、鳥苷標準儲備液、腺苷標準儲備液、尿苷標準儲備液、肌苷標準儲備液和胞苷標準儲備液單獨配制且濃度分別為0.8～1.2mg/ml。

所述堿基混合標準液是通過分別量取胞嘧啶標準儲備液1.0ml、尿嘧啶標準儲備液1.0ml、鳥嘌呤標準儲備液10.0ml、胸腺嘧啶標準儲備液1.0ml、腺嘌呤標準儲備液1.0ml至250ml容量瓶內，加水定容至250ml，

其中，胞嘧啶標準儲備液濃度為3.0～5.0mg/ml；尿嘧啶標準儲備液濃度為3.0～5.0mg/ml；鳥嘌呤標準儲備液濃度為0.3～0.5mg/ml；胸腺嘧啶標準儲備液濃度為3.0～5.0mg/ml；腺嘌呤標準儲備液濃度為3.0～5.0mg/ml。

所述步驟2中配制待測樣品的溶液的操作包括：稱取0.1000克粉碎細度達60目的樣品于玻璃管內，加水15ml，漩渦震蕩3次，每次1min，每次間隔20min；超聲20min，并再次漩渦震蕩；12000g高速離心15min；取上清液稀釋一倍，混勻后保存過濾上機測定。

所述步驟2中的高效液相色譜法采用流動相A為0.1M的磷酸二氫鉀溶液，流動相B為質量含量為25％的甲醇溶液。

所述步驟2中的高效液相色譜法采用如下梯度洗脫程度：

本發明的另一目的在于提供一種既反映產品生產工藝優劣又體現產品營養價值的質量控制指標的方法。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

生產工藝對核苷酸破壞程度的評價方法，其特征在于包括如下步驟：

設定K_A值及K值，其中，

總游離堿基是游離胞嘧啶、游離尿嘧啶、游離鳥嘧啶、游離胸腺嘧啶和游離腺嘌呤的總和；總游離核苷是游離鳥苷、游離腺苷、游離尿苷、游離肌苷、游離胞苷的總和；總游離核苷酸是游離尿苷酸、游離腺苷酸、游離鳥苷酸二鈉、游離胞苷酸、游離肌苷酸的總和；

按下表以K_A及K值共同評價蛋白產品的質量及生產工藝，

上述游離核苷酸、游離核苷及游離堿基的含量通過前述的方法測定且計算得到。