[發(fā)明專(zhuān)利]蛋白產(chǎn)品中游離核酸水解物的測(cè)定方法及生產(chǎn)工藝對(duì)核苷酸破壞程度的評(píng)價(jià)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410652446.2
• 申請(qǐng)日: 2014-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104515817A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許建剛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海征泰飼料有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 廣州新諾專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 劉菁菁

1.蛋白產(chǎn)品中游離核酸水解物的測(cè)定方法，其特征在于采用以下步驟：

(1)分別制備核苷酸混合標(biāo)準(zhǔn)液及堿基混合標(biāo)準(zhǔn)液，

(2)配制待測(cè)樣品的溶液，以步驟1所述的核苷酸混合標(biāo)準(zhǔn)液及堿基混合標(biāo)準(zhǔn)液作為參照液，采用高效液相色譜法通過(guò)洗出峰面積比較得到樣品中游離核苷酸及游離堿基的含量值。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白產(chǎn)品中游離核酸水解物的測(cè)定方法，其特征在于：所述核苷酸混合標(biāo)準(zhǔn)液是通過(guò)分別量取尿苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.0ml、腺苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.0ml、鳥(niǎo)苷酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.0ml、胞苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.0ml、肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.0ml、鳥(niǎo)苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml、腺苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml、尿苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml、肌苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml、胞苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml至100ml容量瓶?jī)?nèi)，加水定容至100ml，

所述尿苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、腺苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、鳥(niǎo)苷酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、胞苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、鳥(niǎo)苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、腺苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、尿苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、肌苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和胞苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液?jiǎn)为?dú)配制且濃度分別為0.8～1.2mg/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白產(chǎn)品中游離核酸水解物的測(cè)定方法，其特征在于：所述堿基混合標(biāo)準(zhǔn)液是通過(guò)分別量取胞嘧啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml、尿嘧啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml、鳥(niǎo)嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10.0ml、胸腺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml、腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml至250ml容量瓶?jī)?nèi)，加水定容至250ml，

其中，胞嘧啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為3.0～5.0mg/ml；尿嘧啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為3.0～5.0mg/ml；鳥(niǎo)嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為0.3～0.5mg/ml；胸腺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為3.0～5.0mg/ml；腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為3.0～5.0mg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白產(chǎn)品中游離核酸水解物的測(cè)定方法，其特征在于所述步驟2中配制待測(cè)樣品的溶液的操作包括：稱(chēng)取0.1000克粉碎細(xì)度達(dá)60目的樣品于玻璃管內(nèi)，加水15ml，漩渦震蕩3次，每次1min，每次間隔20min；超聲20min，并再次漩渦震蕩；12000g高速離心15min；取上清液稀釋一倍，混勻后保存過(guò)濾上機(jī)測(cè)定。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白產(chǎn)品中游離核酸水解物的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟2中的高效液相色譜法采用流動(dòng)相A為0.1M的磷酸二氫鉀溶液，流動(dòng)相B為質(zhì)量含量為25％的甲醇溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白產(chǎn)品中游離核酸水解物的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟2中的高效液相色譜法采用如下梯度洗脫程度：

7.生產(chǎn)工藝對(duì)核苷酸破壞程度的評(píng)價(jià)方法，其特征在于包括如下步驟：

設(shè)定K_A值及K值，其中，

總游離堿基是游離胞嘧啶、游離尿嘧啶、游離鳥(niǎo)嘧啶、游離胸腺嘧啶和游離腺嘌呤的總和；總游離核苷是游離鳥(niǎo)苷、游離腺苷、游離尿苷、游離肌苷、游離胞苷的總和；總游離核苷酸是游離尿苷酸、游離腺苷酸、游離鳥(niǎo)苷酸二鈉、游離胞苷酸、游離肌苷酸的總和；

按下表以K_A及K值共同評(píng)價(jià)蛋白產(chǎn)品的質(zhì)量及生產(chǎn)工藝，

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于：游離核苷酸、游離核苷及游離堿基的含量通過(guò)權(quán)利要求1～6任一所述的方法測(cè)定且計(jì)算得到。