[發明專利]用于鑒別和制備(R)-特異性ω-轉氨酶的方法

有效

• 申請號: 201410652407.2
• 申請日: 2010-08-13
• 公開（公告）號: CN104480155B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 馬蒂亞斯·赫內;烏韋·博恩朔伊爾;卡倫·羅賓斯;塞巴斯蒂安·舍茨勒
• 申請（專利權）人: 羅扎股份公司
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C40B50/06
• 代理公司: 隆天知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;王芝艷

1.制備光學活性手性胺的方法，其包括：

a)提供至少一種(R)-選擇性ω-轉氨酶的至少一個查詢生物分子序列，和至少一個生物分子庫，其中所述查詢生物分子序列如SEQ ID NO:5或7或編碼SEQ ID NO:5或7的相應核苷酸序列所示，所述生物分子庫是NCBI的pubmed蛋白數據庫或核苷酸數據庫；

b)用所述查詢生物分子序列檢索所述生物分子庫，以鑒別出第一靶生物分子序列組，其中以氨基酸水平計算，所述第一靶生物分子序列與所述查詢生物分子序列具有至少20％的序列相同性；

c)在所述第一靶生物分子序列組中選擇第二生物分子靶序列組，所述第二生物分子靶序列組在氨基酸水平上不包含以下氨基酸序列基序c1)至c3)中的至少一種，其中

c1)在95位至97位的氨基酸序列Tyr Xa1Xa2，其中Xa1為氨基酸Ile、Val、Leu、Met、Phe，且Xa2為氨基酸Arg或Lys，或者

c2)在97位至99位的氨基酸序列Tyr Xaa Gln，其中Xaa為氨基酸，和在105位至111位的氨基酸序列Arg Xaa Xa3，其中Xa3為氨基酸，或者

c3)在38位的Thr、在97位的Lys和在107位至109位的氨基酸序列Arg Xa4Xa5，其中Xa4為氨基酸，且Xa5為氨基酸；

而包含：

c4)在95位除Tyr、Arg、Lys外的另一種氨基酸，或在95位的Tyr，但在97位無Arg或Lys，且

c5)在40位無Lys或Arg，且

c6)在161位至165位區域中的至少一個Lys，

以鑒別出第二靶生物分子序列組，和

d)提供生物分子，其具有在步驟c)中鑒別的第二靶生物分子序列，且為具有(R)-選擇性ω-轉氨酶活性的蛋白或至少部分編碼具有(R)-選擇性ω-轉氨酶活性的蛋白，

e)使至少一種氨基受體和至少一種氨基供體與步驟d)所述生物分子對應的具有(R)-選擇性ω-轉氨酶活性的蛋白反應，并獲得所述光學活性手性胺。

2.如權利要求1所述的方法，其中Xa3為His。

3.如權利要求1所述的方法，其中Xa4為Gly。

4.如權利要求1所述的方法，其中Xa5為Tyr。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述生物分子為蛋白，且所述生物分子序列為氨基酸序列。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述生物分子為DNA分子，且所述生物分子序列為DNA序列。

7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述生物分子庫為生物分子數據庫，且在步驟b)中使用生物分子序列比對工具檢索所述生物分子數據庫。

8.如權利要求7所述的方法，其中所述生物分子序列比對工具是BLAST。

9.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其中通過從頭合成提供步驟d)中所提供的蛋白質或DNA分子。

10.如權利要求7所述的方法，其中通過從頭合成提供步驟d)中所提供的蛋白質或DNA分子。

11.如權利要求1-4和6中任一項所述的方法，其中所述生物分子庫為基因庫，且在步驟b)中使用查詢DNA序列分子檢索所述基因庫。

12.如權利要求11所述的方法，其中在步驟c)中使用DNA序列引物選擇所述第二生物分子序列組。

13.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述具有(R)-選擇性ω-轉氨酶活性的蛋白是序列如SEQ ID NO.3所示的生物分子序列。