[發明專利]一種從核桃青皮中分離制備生物堿的方法

有效

• 申請號: 201410650315.0
• 申請日: 2014-11-08
• 公開（公告）號: CN104478878A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 楊衛民;張蘇勤;杜京旗;趙君;劉寶琦
• 申請（專利權）人: 呂梁學院
• 主分類號: C07D471/22
• 分類號: C07D471/22;C07D451/10;C07D221/22;C07D455/03;C07D311/62;C07C65/03;C07C51/47;C07C51/42
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技術領域

本發明涉及生物堿分離制備領域，尤其涉及一種從核桃青皮中分離制備生物堿的方法。

背景技術

核桃(Juglans?regia?L)青皮又稱青龍衣，為核桃外部一層厚厚的未成熟的綠色果皮。其中含有生物堿、萘醌類、黃酮類、二芳基庚烷類、多糖類、小分子萜類等。生物堿為一類重要的來源于生物界(以植物為主)的含氮的有機物，主要存在于植物體內各個器官和組織中。同科同屬植物可能含有相同結構類型的生物堿，在植物的某種器官含量可能較高，相對核桃其它組織。在核桃各組織中，新鮮的青皮中生物堿明顯高于其它組織。

植物體中生物堿含量甚微，但種類眾多，結構和性質差異很大。生物堿通常采取的提取分離方法一般是根據其的溶解度來確定。除季銨堿和一些分子量較低或含極性基團較多的生物堿外，生物堿一般均不溶或難溶于水，但大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有機溶劑。基于這種特性，通常采用非極性溶劑、極性溶劑和混合溶劑進行提取。常見的生物堿的提取方法有冷浸、滲漉、超聲波、索氏提取、熱回流提取等，但存在提取率低、分離不完全和純度較低的問題。

鑒于上述缺陷，本發明創作者經過研究和實踐終于獲得了本創作。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從核桃青皮中分離制備生物堿的方法，用以克服上述技術缺陷。

為實現上述目的，本發明提供一種從核桃青皮中分離制備生物堿的方法，以核桃青皮為原料，經超聲波微波萃取儀輔助處理后，采用多級萃取和HSCCC對生物堿進行分離和制備，其中，用甲醇∶水比例為4∶1的混合液作提取劑，液料比為10∶1，經超聲波微波萃取儀輔助處理15min后，采用多級萃取后獲得氯仿甲醇水生物堿提取液；用氯仿甲醇。

進一步地，該具體過程為：

步驟a，以胡桃青皮為原料，加入10倍體積的甲醇∶水為4∶1的混合液，在超聲波微波輔助萃取儀分三階段進行處理，超聲波頻率為50KHz，模式15∶10，電機轉速900r·min^-1；

離心取上清液，旋轉蒸發器蒸發至原體積的1/10，用2mol·L^-1H₂SO₄酸化至PH為2～3，氯仿萃取3次，將上層酸水溶液層用氨水堿化至PH為10左右，用氯仿∶甲醇比例為3∶1的混合液萃取2次，再用氯仿萃取1次，取氯仿∶甲醇的提取液；

旋轉蒸發，留取少許用坩堝蒸干，計算提取率后用甲醇溶解；

步驟b，薄層層析分離生物堿；稱取羧甲基纖維素鈉加適量的純水溶解，加薄層層析硅膠，混勻后再加微晶纖維素，超聲波清洗除氣泡，圖板制片，備用；

用氯仿∶甲醇比例為16∶1的混合液作展開劑；

步驟c，HSCCC分離制備生物堿，以甲醇作對照，對核桃青皮生物堿樣品和6種標準生物堿；在190-400nm處用紫外可見光度計進行檢測，觀察吸收峰值，并導出波峰數據；

石油醚∶氯仿∶甲醇∶2mol·L^-1H₂SO₄比例為2∶4∶2∶2V/V為溶劑體系，按比例將4種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，室溫下靜置過夜，使用前分得上相和下相，超聲脫氣30min以備用；

將已超聲脫氣后的下相以20mL·min^-1的速度泵入HSCCC分離管中，待下相充滿整個管路，設定分離管順時針旋轉，緩慢調節主機轉數至800r·min^-1，同時以2mL·min^-1流速注入上相，兩相達平衡后由進樣閥進入樣品溶液，同時采集相應的數據，通過紫外檢測檢測流出物，按照色譜峰收集相應的成份。

與現有技術相比較本發明的有益效果在于：HSCCC技術采用了不同物化特性的溶劑體系和多樣性的操作條件，具有較強的適應性，可為從復雜的天然產物粗制品中提取不同特性(如不同極性)的有效成分提供了有利條件。

HSCCC法不需要固相載體，可消除由于樣品在固相載體上的不可逆吸附和降解造成的損失，具有回收率高；可多次進樣，其分離過程都保持很穩定，重現性好；可實現梯度洗脫和反相洗脫，亦能進行重復進樣，分離效率高，分離量較大。

附圖說明

圖1為本發明的分離與制備方法的流程示意圖；

圖2a為本發明的苦參堿紫外光譜掃描圖；

圖2b為本發明的丁溴酸東莨堿紫外光譜掃描圖；

圖2c為本發明的烏頭堿紫外光譜掃描圖；

圖2d為本發明的小檗堿紫外光譜掃描圖；

圖2e為本發明的兒茶素紫外光譜掃描圖；