[發明專利]一種基于SRAP標記的亞麻雜交種種子純度鑒定的方法

在審

• 申請號: 201410648783.4
• 申請日: 2014-11-14
• 公開（公告）號: CN104611415A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 張建平;黨占海;李聞娟;王利民;黨照;趙瑋;趙利
• 申請（專利權）人: 甘肅省農業科學院作物研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙) 11265
• 代理人: 王震秀

1.一種基于SRAP標記的亞麻雜交種種子純度鑒定的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取亞麻總基因組DNA；

2)利用SRAP引物組合M10/E3，以“隴雜1號”基因組DNA為模板進行PCR擴增，或利用SRAP引物組合M2/E5，以“隴雜2號”基因組DNA為模板進行PCR擴增；

3)將擴增后的DNA片段，利用2％瓊脂糖凝膠電泳進行檢測SRAP擴增產物；

4)對電泳結果進行分析，將同時具有雙親特異性標記條帶的單株判定為真正的雜交種，計算種子遺傳純度，計算方法為，通過計算供試種子樣品中雜交種數量占總樣品數量的比例確定種子純度。

2.根據權利要求1所述的一種基于SRAP標記的亞麻雜交種種子純度鑒定的方法，其特征在于，

所述SRAP引物組合M10/E3序列為：

正向引物M10：SEQ?ID?No.1；

反向引物E3：SEQ?ID?No.2；

所述SRAP引物組合M2/E5序列為：

正向引物M2：SEQ?ID?No.3；

反向引物E5：SEQ?ID?No.4。

3.根據權利要求1或2所述的一種基于SRAP標記的亞麻雜交種種子純度鑒定的方法，其特征在于，所述SRAP-PCR反應體系的總體積為25μL，體系包含10×PCR?Buffer?2μL、25mmol/LMg²⁺2μL、2.5mmol/L?dNTPs?3μL、2.5U?Taq酶0.5μL、30ng/μL模板DNA?2μL及25ng/μL引物各1μL，其余用ddH₂O補足；

PCR擴增程序為：94℃預變性3min，94℃變性45S，34.5℃退火20S，72℃延伸60S，共5個循環；然后，再94℃變性45S，50℃退火20S，72℃延伸60S，共38個循環；最后72℃延伸10min，4℃保存。