[發明專利]一種電化學發光適配體傳感器、其制備方法及其用途

有效

• 申請號: 201410647639.9
• 申請日: 2014-11-17
• 公開（公告）號: CN104374765A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發明（設計）人: 吳丹;魏琴;胡麗華;龐雪輝;馬洪敏
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種電化學發光適配體傳感器、其制備方法及其用途，更具體而言，本發明涉及一種基于Eu(III)-多壁碳納米管(MWCNTs)作為發光材料構建的電化學發光適配體傳感器、其制備方法，以及由該方法制備的電化學發光適配體傳感器在測定凝血酶中的用途。

背景技術

凝血酶是由凝血酶原活化變成的絲氨酸蛋白質水解酶。它在炎癥、血液凝固和創傷愈合等方面發揮著極其重要的作用，常用于毛細血管出血的局部止血和外科手術后組織的愈合。凝血酶的濃度及活性作為衡量凝血機制的重要指標之一，對早期診斷、療效及愈后判斷具有十分重要的意義。因此建立準確、快速、高靈敏檢測凝血酶濃度的方法是十分必要的。在傳統檢測方法中，凝血酶的檢測主要是利用抗體與抗原之間的特異作用，然而由于抗體在制備、保存等方面存在缺點，因此在一定程度上限制了它的發展。適配體與抗體類似，除了可以與很多目標分子高親和力、高特異性地結合，而且還具有許多抗體無法比擬的優點，例如：(1)?目標分子范圍廣泛；(2)?體外篩選、化學合成；(3)?分子量小；(4)?性質穩定。這對提高傳感器的使用壽命、穩定性、再生性等非常有利。由于適配體具有以上提及的許多優點，將適體—配體識別技術與其他分析方法結合而發展形成了各種形式的適配體傳感器，主要有熒光適配體傳感器、電化學適配體傳感器以及電化學發光(ECL)適配體傳感器等。其中電化學發光適配體傳感器集成了電化學發光傳感器和適配體兩方面的優勢，既具有電化學發光傳感器的高靈敏度、儀器簡單、可進行原位發光分析等優點，又具有適配體的高選擇性和特異性，從而提高了傳感器的靈敏度、選擇性和穩定性，在凝血酶檢測方面具有廣闊的應用前景。

目前，常見的電化學發光物質主要有釕聯吡啶及其衍生物、魯米諾及其衍生物、發光納米材料。近期，通過對發光納米粒子在生物體內循環和安全性的研究，人們發現除了含毒性元素的納米粒子(如CdSe量子點)在生物體內具有毒副作用外，其他生物相容性好的納米材料(如ZnO、SiO₂、Au等)也表現出了毒性，而且交叉學科的研究證實了在同樣尺寸下發光納米材料中的碳納米材料在生物體內毒性表現最低，所以目前發光碳納米材料被認為是一種非常理想的具有應用前景的檢測材料，備受人們的廣泛關注。發光功能化碳納米材料不僅在化學穩定性、生物相容性、低毒性等方面都具有明顯的優勢，此外還具有光學性能穩定、水溶性好、易功能化等優點。因此開發既具有載體功能又具有發光功能的碳納米材料在生命科學和材料科學研究中具有重要意義，而Eu(III)-MWCNTs作為發光材料用于構建檢測凝血酶的電化學發光適配體傳感器尚未見報道。

本發明將金摻雜的石墨烯滴涂到玻碳電極表面，用于固定捕獲探針，Eu(III)-MWCNTs作為發光材料，利用雜交鏈式反應信號放大和基于核酸外切酶RecJ_f的目標物循環信號放大策略，制備了檢測凝血酶的電化學發光適配體傳感器，測試結果顯示，上述方法制備的電化學發光適配體傳感器的靈敏度、選擇性和穩定性高，基于上述發現，發明人完成了本發明。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種電化學發光適配體傳感器，所述電化學發光適配體傳感器包括：工作電極、參比電極和對電極，所述工作電極的基底電極為玻碳電極，其表面依次修飾金摻雜的石墨烯、捕獲探針與凝血酶適配體的混合溶液、巰基己醇(MCH)、含0.15?U/μL?RecJ_f的凝血酶、NH₂-DNA1和NH₂-DNA2的混合溶液和Eu(III)-MWCNTs。

本發明的再一個目的在于提供一種電化學發光適配體傳感器的制備方法，所述方法制備的傳感器靈敏度高、重現性好。

本發明的另一目的是提供所述電化學發光適配體傳感器在測定凝血酶中的用途。

為了解決上述技術問題，本發明是通過以下措施來實現的。