[發明專利]一種抗氧化多肽及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201410645383.8
• 申請日: 2014-11-12
• 公開（公告）號: CN104356203A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 羅永康;尤娟
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/16;C12P21/06;A23L1/305
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及水產食品加工領域，具體涉及一種以鰱魚魚肉為原料生產的具有抗氧化功能的生物活性肽，以及該抗氧化多肽的制備方法與應用。

背景技術

蛋白質經過水解得到多肽，使得蛋白質的結構被改變，疏水區的活性官能基團暴露，隨著肽鍵的裂解，游離氨基酸增加，從而可以提供質子或電子源，保持較高的氧化還原電位，使其具有清除活性自由基的能力，具有抑制脂質過氧化作用的發生，從而抗氧化肽的抗氧化活性得以提高。氧化對需氧生物特別是脊椎動物和人類是一個重要的代謝過程，但是它卻導致了自由基的形成。自由基是高度不穩定的、易于和其他分子發生化學反應，活性氧自由基(ROS)被認為能引起氧化應激。氧化應激涉及多種人類疾病如癌癥，動脈粥樣硬化，糖尿病，神經系統疾病，如阿爾茨海默病，帕金森氏病等等，以及老齡化。在食品體系中，脂類或蛋白質可能會受到ROS的攻擊經歷氧化過程，從而導致食品產生不愉快味道，顏色發暗，同時也可能產生潛在的毒性產物。抗氧化多肽的應用能使人體免受氧化應激的破壞，并防止食品成分由于捐獻電子給ROS以及中和ROS的負面作用而變質。因此抗氧化肽在醫學、化妝品、生物、食品領域有廣泛的應用價值。

目前，國內外專利對于抗氧化肽的開發均有所涉及。(1)專利EP1188767A1公開了一種來源于酪蛋白的抗氧化肽的制備和分離純化方法；(2)專利US?7273847制備了來自肺表面活性蛋白化合物的多肽具有抑制脂肪氧化的作用和抗菌性；(3)專利US8232243B2公開了含有色氨酸和酪氨酸的肽作為抗氧化的方法，這種抗氧化劑可以用于治療和預防氧化過程帶來的疾病和綜合征；(4)專利CN103275180A公開了一種馬面鲀魚頭蛋白抗氧化肽及其制備方法和用途，該抗氧化肽的氨基酸序列為Leu-Ser-His-Gly-Pro-Tyr(LSHGPY)，分子量為672Da；(5)專利CN?103103242A公開了一種抗氧化活性肽及其制備方法，其特征在于以藍圓鲹魚肉蛋白為原料，采用枯草桿菌2709產生的堿性蛋白酶水解，水解液滅酶后經離心、超濾、凝膠層析和反相高效液相色譜等分離并確定其中兩種天然抗氧化肽的結構，其氨基酸序列分別為His-Asp-His-Pro-Val-Cys(組氨酸-天冬氨酸-組氨酸-脯氨酸-纈氨酸-半胱氨酸)和His-Glu-Lys-Val-Cys(組氨酸-谷氨酸-賴氨酸-纈氨酸-半胱氨酸)；(6)專利CN103431158A公開了一種鴨肉蛋白源抗氧化肽的酶法制備工藝，包括酶解底物的制備、酶解方法和檢測等步驟。

目前，國內外專利中未見以淡水魚魚肉為資源，利用胃蛋白酶制備抗氧化肽的相關報道。

發明內容

本發明的第一目的在于，針對抗氧化多肽產品開發的現狀，提供一種全新的、具有優異抗氧化性能的多肽。

本發明提供了一種抗氧化多肽，其氨基酸序列為：

Tyr-Thr-Ile-Gln-Tyr。

所述多肽可以以鰱魚魚肉為原料通過酶解后得到，也可以通過多肽固相合成等方法得到。

本發明的另一目的在于提供一種簡便、高效、低成本地制備所述抗氧化多肽的方法。

具體的，所述制備方法包括以下步驟：

1)以鰱魚魚肉為原料，加水混合，于80～90℃水浴中靜置15～20min，勻漿，得到魚肉勻漿液；

2)在步驟1)所得魚肉勻漿液中加入胃蛋白酶進行酶解，充分反應后，在95～100℃下保溫3～5min，冷卻至室溫，離心，收集上清液；

3)取步驟2)所得上清液，用孔徑為2500-3000道爾頓陶瓷膜進行超濾，得到含有所述抗氧化多肽的多肽溶液。

本發明步驟1)中，水的加入量與魚肉重量比優選為1～3:1；所述勻漿的條件為10000～13000rpm，勻漿時間優選為1～3min。

本發明步驟2)中，胃蛋白酶的加入量與步驟1)所述鰱魚魚肉原料的重量比優選為1：100～300；所述酶解的具體條件為：在pH?1.8～2.5、35～40℃的條件下進行反應，酶解反應應該充分進行，反應時間優選為0.25～2.0h；所述離心的條件為4000～6000g，離心時間優選為5～10min。

本發明步驟3)中，利用孔徑為2500-3000道爾頓陶瓷膜，采用常規操作進行超濾，收集分子量小于濾膜孔徑的多肽的溶液，該混合溶液中富集了本發明請求保護的抗氧化多肽。該混合溶液進行濃縮、干燥后，可以得到含有目標多肽的多肽混合物。

本發明提供的制備方法還可以包括對所述混合溶液/混合物的純化步驟，純化產物經濃縮、冷凍干燥后，即可得到純度較高的目標抗氧化多肽。