[發(fā)明專利]大瀧六線魚卵黃原蛋白間接ELISA試劑盒及其制備方法、檢測方法及應用

有效

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• 申請日: 2014-11-14
• 公開（公告）號: CN104360075A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設計）人: 王松;王駿;張鐵軍;冷凱良;苗鈞魁;姜勇;羅忻;吳振興
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/74
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 褚慶森

技術領域

本發(fā)明屬于生態(tài)檢測領域，具體涉及一種檢測大瀧六線魚卵黃原蛋白的間接ELISA試劑盒及其應用。

背景技術

持久性有機污染物((Persistent?Organic?Pollutants，POPs)，是指在環(huán)境中難以分解，能夠在環(huán)境中長期存在，可以通過各種傳輸途徑而進行全球尺度的遷移擴散，通過食物鏈在生物體內(nèi)累積放大，對人體和環(huán)境產(chǎn)生毒性影響的一類有機污染物。這些污染物并不是自然界本身就存在的，而是人類工業(yè)革命帶來的產(chǎn)物．持久性有機污染物給人類和環(huán)境帶來的危害已經(jīng)成為全球性問題。為了解決這一問題，聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署(UNEP)和瑞典政府于2001年5月23日在瑞典的斯德哥爾摩聯(lián)合主持召開全權(quán)代表會議，簽署了旨在禁止和/或限制使用12類持久性有機污染物的《關于持久性有機污染物的斯德哥爾摩公約》。POPs具有下列四個重要的特性：?(1)?能夠在環(huán)境中持久地存在；(2)能夠經(jīng)過長距離遷移到達偏遠的極低地區(qū)。(3)?在一定的濃度下會對接觸該物質(zhì)的生物造成有害或有毒影響，POPs大都具有“三致（致癌、致畸、致突變）”效應；(4)?能蓄積在食物鏈中，對有較高營養(yǎng)等級的生物造成影響。由于POPs具有低水溶性、高脂溶性的特點，導致POPs從周圍媒介中富集到生物體內(nèi)，并通過食物鏈的生物放大作用達到中毒濃度。

POPs在海洋環(huán)境中難降解、分布廣、易在生物體內(nèi)富集，對生態(tài)環(huán)境的危害性很大，POPs不僅影響到海洋生物的棲息與繁殖，通過食物鏈的傳遞，也給人類自身生存和生活造成威脅。各項研究顯示POPs濃度水平并不很高，但是由于其生物富集性可通過食物鏈傳遞富集，使得處于食物鏈越高的生物受到的威脅越大。在海洋環(huán)境和其他水生生態(tài)系統(tǒng)中，POPs的傳播鏈是：空氣中的POPs最初是被微生物吸收→較大生物吃微小生物→小魚食用較大生物→大魚吃小魚→有時是鳥類或人類食用大魚。食肉類物種體內(nèi)的POPs含量將會達到其捕食對象體內(nèi)POPs平均含量的10倍之多。這導致了在最高端食肉物種體內(nèi)極高的POPs含量。根據(jù)環(huán)境加拿大（Environment?Canada）組織的報告，食用魚類的鳥蛋中POPs污染物達到魚類本身生活的水中POPs含量的2500萬倍。而位于生物鏈頂端的人類，則又把這些毒性放大了7萬倍。

當前急需全面提升海洋POPs實時監(jiān)測、預警能力，對海水養(yǎng)殖的污染源進行研究，探討魚類飼料、人類活動及環(huán)境因素等對水產(chǎn)品質(zhì)量的影響，為海水養(yǎng)殖產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)控和海域環(huán)境的管理提供科學依據(jù)。因此建立起快速、高效、大通量針對POPs特別是新增加種類污染物的有效檢測方法是加強和完善對環(huán)境中POPs的檢測及風險控制管理的前提和基礎。研究表明，大多數(shù)POPs具有環(huán)境雌激素效應，是環(huán)境雌激素類似物，因此可以將環(huán)境雌激素生物檢測方法用于POPs的生物檢測。

美國、歐盟和日本相繼建立起以魚類為模式生物的環(huán)境雌激素篩選評價體系，其中卵黃原蛋白(Vitellogenin,?Vtg)作為重要的生物篩選指標，已經(jīng)得到廣泛應用。魚類卵黃原蛋白是卵黃蛋白的前體，是一種大分子量的脂磷聚糖蛋白。卵黃形成期，在雌激素的刺激下卵黃原蛋白由肝臟合成，并通過血液運輸?shù)桨l(fā)育的卵巢中，被卵巢吸收；通常，卵黃原蛋白只能在卵黃形成期的雌魚體內(nèi)檢測到，但是，雄魚和幼魚體內(nèi)也含有卵黃原蛋白基因，在環(huán)境雌激素的誘導下，也能合成和分泌卵黃原蛋白。因此，卵黃原蛋白是環(huán)境雌激素篩選的特異性生物標志物，通過檢測雄魚體內(nèi)卵黃原蛋白水平可以評價環(huán)境化學物的雌激素活性。然而，至今我國還未見海洋環(huán)境POPs生物監(jiān)測技術的研發(fā)。

大瀧六線魚(Hexagrammos?otakii?Jordan?et?Starks?)又名歐式六線魚，俗稱黃魚，隸屬于鲉形目(Scorpaeniformes)、六線魚科(Hexagrammidae)、六線魚屬(Hexagrammos)。大瀧六線魚屬冷溫性近海底層魚類，在我國主要分布于黃海和渤海沿岸多巖礁海區(qū)，在青島等近海水域中容易捕獲。因此，以黃渤海常見魚種大瀧六線魚為實驗生物，建立其卵黃原蛋白的定量檢測技術，有助于開展我國近岸海域POPs生物監(jiān)測工作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種檢測大瀧六線魚卵黃原蛋白的間接ELISA試劑盒及其制備方法、檢測方法和應用，以滿足現(xiàn)有技術的上述要求。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案如下：