[發(fā)明專利]一種大規(guī)模制備高產(chǎn)率、高純度、高安全的口蹄疫全病毒顆粒標記疫苗的方法及其產(chǎn)品

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410643314.3
• 申請日: 2015-08-04
• 公開（公告）號: CN104491855A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發(fā)明（設計）人: 呂宏亮;張澍
• 申請（專利權(quán)）人: 呂宏亮;張澍;內(nèi)蒙古必威安泰生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;C12N7/00;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及一種口蹄疫全病毒顆粒標記疫苗的制備方法及其產(chǎn)品，特別涉及一種大規(guī)模制備高產(chǎn)率、高純度、高安全口蹄疫全病毒顆粒標記疫苗的方法及其產(chǎn)品，本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領域。

背景技術(shù)

口蹄疫(Foot-and-mouth?disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth?disease?virus，F(xiàn)MDV)引起的偶蹄動物烈性接觸性傳染病，主要危害牛、羊、豬、駱駝等，發(fā)病率極高，傳播速度極快，世界動物衛(wèi)生組織將其列為A類人獸共患病首位。雖然該病的死亡率不高(幼畜除外)，但可造成動物生產(chǎn)性能下降，且撲殺動物需花費大量的人力、物力和財力，還會影響國際貿(mào)易，造成嚴重的經(jīng)濟損失和生物恐怖。

口蹄疫病毒屬于小RNA病毒科，口蹄疫病毒屬。目前已知有7個血清型，A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3、ASIA1，每個血清型又有很多亞型，不同毒株間的遺傳變異可導致抗原性差異。我國流行3個血清型且致病力最強、分布最廣泛，分別為A型、O型以及ASIA1型。

純化口蹄疫疫苗配方中口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白L、B2、C3、D3、A3、AB123、3ABC含量甚微，含高度純化滅活完整口蹄疫病毒146S顆粒，不引起動物產(chǎn)生抗非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體，自然感染動物產(chǎn)生非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，因此檢測動物體內(nèi)的3AB1或3ABC非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體存在與否，可區(qū)別動物口蹄疫病毒免疫和感染，發(fā)揮口蹄疫防控的免疫和檢測作用。

疫苗接種是特異性預防FMD的有效手段，制備安全有效的疫苗是成功地預防、控制乃至最終消滅FMD的先決條件。FMD滅活疫苗具有良好的免疫原性，在預防和控制FMD的過程中發(fā)揮著重要作用，但在疫苗制備過程中和產(chǎn)品中的一些宿主細胞殘余蛋白、核酸、牛血清白蛋白、化學試劑等如果不加以控制，免疫動物則引起動物嚴重副反應甚至死亡、特別是可能使動物致癌或影響肉類動物的食品安全。

用合適的宿主細胞培養(yǎng)病毒制備疫苗抗原或重組藥物，從用藥安全性考慮，必須純化抗原去除影響口蹄疫病毒疫苗安全性的雜質(zhì)，以使其符合藥品質(zhì)量規(guī)范和安全要求，同時盡量減少工藝或原輔材料中可能潛在的影響疫苗效果和安全的物質(zhì)，特別是盡量避免使用動物源性的原輔材料，降低傳播動物疫病如口蹄疫、藍耳病、瘋牛病、豬瘟等傳染病風險。

用生物反應器生產(chǎn)口蹄疫病毒抗原提高了細胞密度、病毒抗原產(chǎn)量，同時增加了細胞雜質(zhì)和添加物的量，也增加分離、濃縮純化口蹄疫病毒的步驟或工藝。過去因為口蹄疫抗原庫建立和生物大分子分離技術(shù)發(fā)展程度不高，純化口蹄疫病毒多為硫酸銨等濃縮、純化技術(shù)。現(xiàn)代規(guī)模化濃縮、純化病毒抗原技術(shù)，如柱層析、蔗糖梯度超速離心技術(shù)、切向流中空纖維柱、深層過濾模塊幾乎沒有在獸用疫苗生產(chǎn)中使用，這些技術(shù)和設備的應用易于疫苗質(zhì)量控制和保證、GMP認證和工藝驗證。

現(xiàn)行生產(chǎn)滅活口蹄疫病毒抗原多采用BHK-21細胞為疫苗抗原生產(chǎn)基質(zhì)，采用懸浮培養(yǎng)/后繼滅活、濃縮工藝達到部分純化、乳化制成疫苗供使用。盡管該疫苗的免疫效果達到疫苗規(guī)程要求，但按現(xiàn)代疫苗的安全性要求，雜質(zhì)含量高、總蛋白含量高，有效抗原146S顆粒含量低，對有效抗原量、BHK-21細胞殘余DNA、BHK-21細殘余蛋白、牛血清白蛋白、滅活劑、防腐劑以及生產(chǎn)過程化學添加物沒有明確界定和定量，盡管2013年實行了新的疫苗質(zhì)量標準，但疫苗的質(zhì)量標準和工藝應不斷提高，以保證疫苗穩(wěn)定、安全、有效。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種大規(guī)模制備高產(chǎn)率、高純度、高安全口蹄疫全病毒顆粒標記疫苗的方法及其產(chǎn)品。

本發(fā)明的一種大規(guī)模制備高產(chǎn)率、高純度、高安全的口蹄疫全病毒顆粒標記疫苗的方法，其特征在于包括以下步驟：