[發明專利]一株產幾丁質酶的枯草芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201410643071.3
• 申請日: 2014-11-14
• 公開（公告）號: CN104357361A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 李靜;譚海剛;王鳳舞
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/42;A23L1/33;A23L1/24;C12R1/125
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于微生物應用技術領域，具體涉及一株產幾丁質酶枯草芽孢桿菌及其應用。

背景技術

幾丁質酶(chitinase)能催化降解甲殼素(幾丁質)生成幾丁寡糖，幾丁寡糖具有水溶性，是甲殼素、殼聚糖產品的升級產品，對腐敗菌的抑制效果顯著，是性能優良的天然食品防腐保鮮劑。同時，幾丁寡糖還具有能促進有益微生物(如雙歧桿菌、乳酸菌)的生長，改善腸道微生物菌群，提高機體免疫力，促進肝脾抗體形成、促進鈣及礦物質的吸收、降血脂、去除氧負離子自由基延緩衰老、抑制腫瘤細胞生長等功能，可應用于醫藥、功能性食品、化妝品等領域。

我國有廣闊的海岸線和大面積水產養殖基地，幾丁質資源豐富，但開發利用率低，生產水平不高，產品檔次低，造成資料浪費的同時也造成了環境污染。而生產幾丁寡糖就是一條利用幾丁質開發高附加值產品的一條重要途徑。目前，幾丁寡糖的生產主要有化學降解法和生物酶法兩種方法；但化學降解法成本高，不易控制，產物聚合度較低(生物活性低)且多為單糖，應用價值不高，而且會帶來的嚴重的酸污染，其使用受到嚴格限制。而生物酶法具有催化效率高，反應溫，具有特異性，易控制，可生成不同聚合度的幾丁寡糖，具有良好的應用前景，但一個限定因素就是需要具有高幾丁質酶酶活性的微生物。

發明內容

本發明的目的是提供一株產幾丁質酶的枯草芽孢桿菌其應用，所述產幾丁質酶枯草芽孢桿菌經等離子體誘變獲得，具有更高的幾丁質酶酶活力和蛋白酶酶活力，可作為發酵劑、益生菌和防腐劑，廣泛應用于酶制劑和食品工業。

本發明一方面提供了一株枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PLa119，于2014年5月14日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.9166。

本發明的枯草芽孢桿菌可應用于酶制劑、菌制劑、防腐劑和制備幾丁寡糖。

本發明的另一方面提供了含有上述枯草芽孢桿菌的蝦頭醬。

所述的蝦頭醬，制備過程為：蝦頭清洗打漿，接入枯草芽孢桿菌PLa119，經半固態發酵，加入香辛料，制得蝦頭醬成品。

上述枯草芽孢桿菌可作為益生菌生產菌制劑，制備過程為：蝦殼烘干，粉碎打漿，接入枯草芽孢桿菌PLa119，經半固態發酵，加入奶粉和蔗糖，制得枯草芽孢桿菌菌制劑。

本發明還提供一種幾丁質酶的制備方法，是用上述的枯草芽孢桿菌PLa119接種到培養基中發酵后制備的；其中培養基組成如下：膠體幾丁質12g/L、豆粕9.5g/L、蛋白胨5g/L、酵母膏4g/L、KH₂PO₄0.3g/L、葡萄糖0.5g/L、MgSO₄·7H₂O?0.6g/L?g/L、FeSO₄·7H₂O?0.01g/L、ZnSO₄0.01g/L。最佳發酵條件為：溫度為35℃、轉速為180r/min、接種量為4％、初始pH為7.0、發酵時間為48h。

本發明經等離子體誘變篩選到一株枯草芽孢桿菌PLa119。該菌株具有較高的幾丁質酶酶活力和蛋白酶酶活力，且該菌株營養需要簡單，繁殖力強，可作為發酵劑、益生菌和防腐劑，應用前景廣闊。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明進行詳細的描述。

實施例1：枯草芽孢桿菌PLa119的選育及其產酶條件優化

1、出發菌株的枯草芽孢桿菌篩選自蝦頭富集過的土壤，經青島農業大學食品微生物實驗室鑒定、保藏，具有產幾丁質酶和蛋白酶能力。

2、培養基

(1)富集培養基(g/L)：牛肉膏3，蛋白胨10，NaCl?5，pH?7.0。

(2)分離培養基(g/L)：膠體幾丁質2.5，MgSO₄·7H₂O?0.5，K₂HPO₄，KH₂PO₄0.3，FeSO₄·7H₂O?0.01，(NH₄)₂SO₄3，瓊脂20。pH?7.0，121℃，滅菌20min。