[發明專利]檢測高油酸花生FAD2A和FAD2B基因位點突變基因型的引物及其PCR檢測方法

在審

• 申請號: 201410642798.X
• 申請日: 2014-11-14
• 公開（公告）號: CN104328198A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 張新友;齊飛艷;黃冰艷;劉華;石磊;張忠信;董文召;湯豐收
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

技術領域

本發明屬于農業生物工程領域，具體涉及一種檢測高油酸花生FAD2A和FAD2B基因突變基因型的引物及其PCR檢測方法。

背景技術

花生是人們日常生活中不可缺少的食材之一，花生油、花生醬等花生制品在生產和儲存期間會由于脂質氧化而產生不良的氣味、口味及貨架期縮短等問題。高油酸花生能改善普通花生的這些缺點，因為油酸具有較好的氧化穩定性，從而減少脂質氧化。在豬飼料中添加高油酸花生能提高豬肉脂肪中的不飽和脂肪酸含量，而且不影響豬肉的其它品質。食用高油酸花生對人體健康有益，與低脂飲食相比，高單不飽和脂肪酸、低膽固醇的飲食（包括橄欖油、花生油、花生醬等）更有利于降低心腦血管疾病風險；而且無論胰島素來自體內分泌還是體外注射，高油酸花生油都能反向抑制炎癥細胞因子TNF-α。因此，高油酸花生倍受青睞，根據市場需要選育優質、高產、抗病（逆）的高油酸品種也成為花生育種的重要目標。

含80%油酸和2%亞油酸的高油酸花生自發突變體F435最早是在Florida育種項目中發現的。高油酸和普通油酸花生的雜交F2的分離比為3:1或15:1，表明高油酸這一性狀受兩對隱性基因(ahFAD2A和ahFAD2B)調控。與普通油酸花生的FAD2A和FAD2B基因相比，高油酸花生中這兩個基因的存在與高油酸性狀相關的SNP突變；一個是FAD2A基因起始密碼子后448bp處G:C→A:T的突變（D150N氨基酸的變異），另一個是FAD2B基因起始密碼子后442bp處A插入的突變，使終止密碼子提前出現。后來又發現的Mycogen-Flavo（MF）和M2-225這兩個高油酸突變體與F435不同，在它們的FAD2B基因中是微型反向重復轉座元件（MITE）插入導致基因功能的改變。這些高油酸突變體常常被用作高油酸花生育種的高油酸性狀供體親本。為了提高高油酸花生的育種效率，開發用于輔助育種的檢測方法非常必要。

發明內容

本發明要解決的技術問題：針對現有技術存在的缺陷，提供一種檢測FAD2A和FAD2B突變位點的引物及其PCR檢測方法；該技術具有方法簡單、成本低和結果穩定等優點；

本發明還提供了利用PCR產物帶型區分FAD2A和FAD2B基因九種基因型的方法，該方法能顯著提高高油酸性狀選擇的準確性，降低育種成本，提高育種效率，為分子標記輔助選擇高油酸花生品種提供了新的技術手段。

本發明的技術方案：

?一種檢測高油酸花生FAD2A和FAD2B突變基因型的引物，所述引物如下：?

（1）檢測ahFAD2A基因448bp處堿基突變的引物設計：

當檢測ahFAD2A基因448bp處無突變時，在花生野生型FAD2A基因序列-88bp處設計正向引物FAD2A-F，在花生野生型FAD2A基因序列448bp處設計反向引物FAD2A-WT-R；

FAD2A-F：5’?…...GATTACTGATTATTGACTT…...3’，

FAD2A-WT-R：?5’?…...GTTTTGGGACAAACACTTCACC…...3’；

當檢測ahFAD2A基因448bp處堿基突變時，在花生野生型FAD2A基因序列-88bp處設計正向引物FAD2A-F，在花生突變型FAD2A基因序列448bp處設計反向引物FAD2A-Mu-R；

FAD2A-F：5’?…...GATTACTGATTATTGACTT…...3’，

FAD2A-Mu-R：5’?…...GTTTTGGGACAAACACTTAGAT…...3’；

（2）檢測ahFAD2B基因442bp位點突變的引物設計：

當檢測ahFAD2B基因442bp位點無堿基插入時，在花生野生型FAD2B基因序列-80bp處設計正向引物FAD2B-F，在花生野生型FAD2B基因序列442bp處設計反向引物FAD2B-WT-R；

FAD2B-F：5’?…...CAGAACCATTAGCTTTG…...3’，

FAD2B-WT-R：5’?…...GACAAACACTTCGTCGCGTTAG…...3’；?