[發明專利]控制黃瓜無卷須性狀的基因及與黃瓜卷須性狀相關的SNP標記

在審

• 申請號: 201410642693.4
• 申請日: 2014-11-07
• 公開（公告）號: CN104672315A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 黃三文;王深浩;張忠華;楊學勇;邵光金;齊建建
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;C12N15/82;C12Q1/68;C12N15/11;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A01H5/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.黃瓜Csa5G644520蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.控制黃瓜無卷須性狀的基因Csa5G64452，其特征在于，其核苷酸序列為：

i)Seq?ID?No.2所示的核苷酸序列；或

ii)在嚴格條件下與Seq?ID?No.2所示序列雜交的核苷酸序列；

所述嚴格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜。

3.含有權利要求2所述基因Csa5G64452的載體。

4.含有權利要求2所述基因Csa5G64452的工程菌。

5.權利要求2所述基因Csa5G64452在控制黃瓜無卷須性狀中的應用。

6.一種與黃瓜卷須性狀相關的SNP標記，其特征在于，其位于如Seq?ID?No.2所示的控制黃瓜無卷須性狀的基因Csa5G64452第1012bp處，此處堿基為T的黃瓜表現為無卷須性狀，而此處堿基為A的黃瓜表現為有卷須性狀。

7.用于檢測權利要求6所述SNP標記的特異性引物對，其特征在于，包括正向引物F?5’-AATAATATCATTGGGATCATGTGG-3’和反向引物R?5’-TTGGAAGCTGGAAAATAGAAAATAT-3’。

8.一種鑒定有無卷須性狀黃瓜的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測黃瓜的基因組DNA；

2)以待測黃瓜的基因組DNA為模板，利用權利要求7的引物對，進行PCR擴增反應；

PCR擴增體系以20μl計為：10-20ng/μl模板DNA?1μl，10pmol/μl引物F和R各1μl，10mmol/L?dNTP?mix?0.4μl，0.5U/μL?Taq?DNA聚合酶0.3μl，10×PCR反應緩沖液2μl，余量為水；

PCR反應條件為：94℃4分鐘；94℃20秒，55℃20秒，72℃30秒，35個循環；72℃5分鐘；

3)檢測PCR擴增產物，具體如下：

采用dCAPS法檢測PCR擴增產物：用內切酶SspI對PCR擴增產物進行酶切，并對酶切產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，如果檢測結果僅為一條140bp大小的條帶，則待測黃瓜在位于如Seq?ID?No.2所示的控制黃瓜無卷須性狀的基因Csa5G644520序列第1012bp處的堿基為T，屬于無卷須性狀的黃瓜品種；檢測結果為一條117bp大小的條帶，或同時含有140bp和117bp兩條帶，則待測黃瓜在位于如Seq?ID?No.2所示的控制黃瓜無卷須性狀的基因Csa5G644520序列第1012bp處的堿基為A或A/T雜合，屬于有卷須性狀的黃瓜品種。

9.含有權利要求7所述引物對的用于檢測黃瓜有無卷須性狀的試劑盒。

10.權利要求6所述與黃瓜卷須性狀相關的SNP標記在黃瓜分子標記輔助育種中的應用。