[發明專利]一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法

在審

• 申請號: 201410640894.0
• 申請日: 2014-11-13
• 公開（公告）號: CN104372056A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發明（設計）人: 黃惠莉;張爽;張育榮;張鷺鷹;王開明
• 申請（專利權）人: 華僑大學;廈門東海洋水產品有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12P13/00
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

1.一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)將章魚下腳料去除雜質、洗凈后，進行組織搗碎勻漿，得固液比為1:2.5～25的勻漿液；

(2)在勻漿液中添加堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶或動物蛋白酶進行酶解后，通過抽濾、紗布過濾或離心進行固液分離，得第一清液，上述酶解的溫度為30～70℃，酶解pH值為4.5～10，酶解時間為0.25～6h；

(3)用截留分子量1～10kDa的超濾膜對第一清液進行分離處理，得第二清液和含有混合多肽活性物質的超濾濃液，上述超濾膜的操作壓力為0.1～0.4MPa，液料流速為2.5～12.5L/h；

(4)用截留分子量300～500Da納濾膜對第二清液進行分離處理得第三清液和納濾濃液，第三清液為復合氨基酸水解液，再對超濾濃液和納濾濃液進行凝膠柱層析純化后，合并得含有抗氧化活性物質的總濃液，上述納濾膜的操作壓力為0.5～0.7MPa，凝膠柱層析純化所用的填料為DEAE-75、G75、G50或G25；

(5)分別將總濃液和第三清液經層析純化后進行-50℃冷凍干燥，即分別得到所述抗氧化活性物質和所述復合氨基酸。

2.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：酶解所用酶為堿性蛋白酶，酶解溫度為30～70℃，酶解pH為5～9，勻漿液固液比為1:5～25，酶添加量為0.05～0.4％；酶解時間為1～3h。

3.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：酶解所用酶為中性蛋白酶，酶解溫度為45～65℃，酶解pH為6～10，勻漿液固液比為1:10～20，酶添加量為0.1～0.4％；酶解時間為1.2～3.5h。

4.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：酶解所用酶為木瓜蛋白酶，酶解溫度為40～65℃，酶解pH為4.5～8.5，勻漿液固液比為1:2.5～25，酶添加量為0.005～0.08％；酶解時間為0.25～2h。

5.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：酶解所用酶為動物蛋白酶，酶解溫度為40～65℃，酶解pH為5～9，勻漿液固液比為1:5～25，酶添加量為0.05～0.25％；酶解時間為2～6h。

6.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：所述步驟(2)離心的速度為4500r/min，時間為15min。

7.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：所述步驟(2)的紗布過濾為8層紗布過濾。

8.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：所述納濾膜為截留分子量300Da的芳香酰胺卷式納濾膜，操作壓力為0.6MPa。

9.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：所述超濾膜為聚醚砜卷式超濾膜，其操作壓力為0.25MPa。

10.如權利要求1所述的一種利用章魚下腳料獲得抗氧化活性物質和復合氨基酸的方法，其特征在于：所述步驟(5)的層析純化所用的層析柱為DEAE-75、G75、G50或G25，洗脫液為去離子水，檢測波長220nm。