[發(fā)明專利]一種重組副豬嗜血桿菌免疫保護性抗原PotD及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410640742.0
• 申請日: 2014-11-12
• 公開（公告）號: CN104357458A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 文心田;文翼平;代科;曹三杰;黃小波;伍銳;張祿滑;周鵬;李英;何綠琴;丁玲強
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/285;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 成都高遠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

2.一種重組載體，其特征在于：包含SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組載體，其特征在于：所述的重組載體是重組pET28a質(zhì)粒。

4.一種重組菌，其特征在于：它包含權(quán)利要求2或者3所述的重組載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組菌，其特征在于：所述的重組菌為重組大腸桿菌。

6.一種重組PotD蛋白，其特征在于：它由SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列編碼。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組PotD蛋白，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

8.一種制備權(quán)利要求6或7所述重組PotD蛋白的方法，其特征在于：包含如下步驟：

ⅰ、取權(quán)利要求5所述的重組大腸桿菌組菌，接種到添加有終濃度為50μg/ml的卡拉霉素的LB培養(yǎng)基上，37℃、280r/min搖床培養(yǎng)，至OD₆₀₀值達到0.5～0.6時，加入IPTG至終濃度為0.2～1.5mmol/L，25～42℃誘導表達1～7h；

ⅱ、離心，得菌體，裂解，取沉淀，分離純化，即得。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：步驟ⅰ中，IPTG的終濃度為1.0mmol/L；誘導表達的溫度為30℃；誘導表達的時間為5h。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：步驟ⅱ中，所述分離純化的方法如下：取沉淀，用的包涵體洗滌液重懸，離心，棄上清，重復前述步驟2次，即可；其中，包涵體洗滌液包含如下濃度的成分：50mmol/L?Tris－HCl，0.5mol/L?NaCl，2mol/L尿素，2％Triton。