[發(fā)明專利]丹參藥材中水溶性成分的含量測(cè)定方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410639741.4
• 申請(qǐng)日: 2014-11-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104374844A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-02-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張觀福
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州信邦制藥股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務(wù)所(普通合伙) 11362
• 代理人: 郭防

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及丹參藥材中水溶性成分含量測(cè)定方法及其應(yīng)用，屬于中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

丹參(拉丁學(xué)名：Salvia?miltiorrhiza?Bunge)又名赤參，紫丹參，紅根等。根入藥，含丹參酮，為強(qiáng)壯性通經(jīng)劑，有祛瘀、生新、活血、調(diào)經(jīng)等效用，為婦科要藥，主治子宮出血，月經(jīng)不調(diào)，血瘀，腹痛，經(jīng)痛，經(jīng)閉，廟痛。對(duì)治療冠心病有良好效果。此外亦治神經(jīng)性衰弱失眠，關(guān)節(jié)痛，貧血，乳腺炎，淋巴腺炎，關(guān)節(jié)炎，瘡癤痛腫，丹毒，急慢性肝炎，腎孟腎炎，跌打損傷，晚期血吸蟲(chóng)病肝脾腫大，癲癎。外用又可洗漆瘡。

丹參的主要化學(xué)成分分為脂溶性和水溶性兩大類：丹參的脂溶性成分大多為共軛醌、酮類化合物，丹參的水溶性成分主要為酚酸類物質(zhì)。丹參的主要藥理作用為可降低沙土鼠和大鼠缺血性腦卒中的發(fā)病率和死亡率，減輕缺血后引起的腦水腫，改善冠脈循環(huán)，對(duì)心肌缺血和心肌梗死保護(hù)，改善微循環(huán)，改善血液流變性，抑制凝血、激活纖溶，抑制血小板功能和抗血栓形成，穩(wěn)定紅細(xì)胞膜，抗肝纖維化，降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化，促進(jìn)組織的修復(fù)與再生作用等。

丹參品種、產(chǎn)地和采收期的不同會(huì)造成其成品質(zhì)量的差異。為保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性，對(duì)其水溶性成分的含量測(cè)定及指紋圖譜研究較多。《丹參藥材水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜研究》(周欣等，色譜，2005年03期，292～295)中公開(kāi)了一種丹參藥材水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜的檢測(cè)方法。

現(xiàn)有技術(shù)中，丹參藥材中水溶性成分含量測(cè)定及指紋圖譜檢測(cè)中，一般只測(cè)定其中一至兩種成分的含量。為了減少分開(kāi)多次測(cè)定丹參藥材不同水溶性成分含量而產(chǎn)生的誤差，如果能一次性測(cè)定多種成分的含量，不僅可以節(jié)約時(shí)間和成本，還可以使得同一系統(tǒng)條件下的測(cè)試結(jié)果更穩(wěn)定、可靠。然而目前尚未有同時(shí)測(cè)定和檢測(cè)丹參多種組分的含量以及指紋圖譜的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種丹參藥材中水溶性成分的含量測(cè)定方法及其應(yīng)用，能夠同時(shí)測(cè)定丹參藥材中多種水溶性成分的含量，并檢測(cè)其指紋圖譜，所述測(cè)定方法對(duì)丹參藥材中水溶性成分的分離效果好，具有快速、準(zhǔn)確、高重現(xiàn)性、高回收率的特點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

丹參藥材中水溶性成分的含量測(cè)定方法，所述方法是以丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對(duì)照品為對(duì)照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90為流動(dòng)相梯度洗脫的超高效液相色譜法。

具體的含量測(cè)定方法為：照超高效液相色譜法，按照以下步驟測(cè)定：

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.026％磷酸水溶液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脫：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；檢測(cè)波長(zhǎng)為276～306nm；流速為0.1～0.5mL·min-1；柱溫為25℃～35℃；理論板數(shù)按按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；

(2)對(duì)照品溶液的制備：取丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對(duì)照品適量，精密稱定，分別加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五種對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別吸取各對(duì)照品儲(chǔ)備液，加5％甲醇配制成丹參素對(duì)照品濃度為82.2μg/mL、原兒茶醛對(duì)照品濃度為15.5μg/mL、迷迭香酸對(duì)照品濃度為37.2μg/mL、丹酚酸B對(duì)照品濃度為522.5μg/mL、丹酚酸A對(duì)照品濃度為32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏備用，作為對(duì)照品溶液；

(3)供試品溶液的制備：取丹參藥材粉末0.2g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，加入40mL?5％甲醇，超聲提取30min，用5％甲醇補(bǔ)足重量；濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；

(4)測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1μL，注入超高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。

前述含量測(cè)定方法中，步驟(1)中檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，流速為0.2mL·min-1，柱溫為30℃。

丹參藥材中水溶性成分的含量測(cè)定方法在丹參藥材指紋圖譜檢測(cè)中的應(yīng)用。

前述含量測(cè)定方法的應(yīng)用，是用指紋圖譜軟件對(duì)含量測(cè)定方法中得到的17分鐘內(nèi)的色譜圖進(jìn)行處理，即得丹參藥材水溶性成分的指紋圖譜。