[發(fā)明專利]一種抗乙型肝炎病毒x蛋白抗體酶聯(lián)免疫測定試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410637265.2
• 申請日: 2014-11-12
• 公開（公告）號: CN104297494A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張曉東;葉麗虹
• 申請（專利權(quán)）人: 天津托普法瑪生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京泛誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11298
• 代理人: 吳立;文琦

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和免疫學領(lǐng)域，具體涉及檢測肝癌標志物乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)抗體的試劑盒。

背景技術(shù)

人體我國每年約有11～13萬人死于原發(fā)性肝癌，占全球肝癌死亡數(shù)的半數(shù)之多。近年來，通過提高肝癌早期診斷率、改進肝癌切除方法和實施肝移植等手段，我國部分肝癌高發(fā)地區(qū)的死亡率有所下降,但是肝癌總體的發(fā)病率仍然呈上升趨勢。

目前，影像學診斷、細胞與組織學診斷及化學診斷是腫瘤診斷的三大主要方法。影像學診斷在肝癌診斷中起重要的作用，但是在診斷小肝癌及區(qū)分良惡性結(jié)節(jié)中均具有一定的局限。超聲檢查或CT陽性結(jié)果，結(jié)合血清甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)水平高于400ng/ml的檢測結(jié)果，可對肝癌做出確診。但是，通常當這些條件都符合時，己經(jīng)錯過了治療的最佳時機。無論是超聲波檢查、CT掃描還是核磁共振，對小病灶的鑒定都有一定的局限性，尤其是肝硬化結(jié)節(jié)在影象學上與小肝癌結(jié)節(jié)有許多的相似之處。因此，雖然影像學技術(shù)在今年來取得了巨大的進步，但臨床上仍需結(jié)合肝癌的分子標志物，在較為復雜的病例中將良惡性肝病進行區(qū)分。

目前肝癌診斷最常用的標志物是甲胎蛋白(AFP)，在癥狀和影像學改變發(fā)生前數(shù)月即可出現(xiàn)異常。正常人血清中AFP含量一般小于10ng/ml。當AFP的診斷值定為20ng/ml時，其敏感性為50％-60％，但在腫瘤較小的病例中，敏感性顯著降低，有報道僅為40％。單獨使用AFP作為肝癌診斷標志物的另一個問題是缺乏特異性，在相當多的慢性肝炎患者尤其是肝硬化患者中，AFP含量也達20-200ng/ml。目前認為可與AFP互補診斷的標志物有AFP異質(zhì)體、Y一谷氨酞轉(zhuǎn)移酶同工酶Ⅱ和異常凝血酶原等，但由于它們在敏感性和特異性上的不足，以及檢測方法的繁瑣復雜，使其始終停留在實驗室研究水平，未能轉(zhuǎn)化成臨床常規(guī)檢查項目。因此，探索新的腫瘤分子標志物，以及建立相應(yīng)的易于推廣的檢測方法，仍是當今肝癌研究領(lǐng)域的重要課題之一。

隨著對HBV和原發(fā)性肝癌研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)HBV中的x基因表達產(chǎn)物(HBx)在肝癌形成過程中起著關(guān)鍵的作用。在誘發(fā)肝細胞癌的眾多因素中，乙型肝炎病毒感染占到50％以上。最新的研究顯示，HBx具有廣泛的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，與慢性HBV感染者發(fā)展成為HCC密切相關(guān)。x基因位于HBV基因組的1374-1836位置，編碼155個氨基酸的多肽，即HBx。x基因常隨HBV基因組一同整合于肝細胞的染色體中，利用宿主細胞轉(zhuǎn)錄和翻譯體系合成HBx。HBx具有廣泛的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，不僅能夠激活病毒基因調(diào)控序列，而且能夠與宿主細胞多種蛋白相互作用，從而影響宿主細胞周期、影響細胞增殖分化與凋亡、使肝細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。HBx可與轉(zhuǎn)錄因子XPA-1、DDB1、RPB5和TFIIB結(jié)合，以提高基因轉(zhuǎn)錄水平、抑制DNA的修復、促進病毒自身復制；HBx還具有反式激活作用，可上調(diào)多種細胞因子及其受體，如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、胰島素樣生長因子(IGF)及其受體的表達；激活C-myt、N-ras等癌基因，與抑癌基因p53結(jié)合，抑制P53的核轉(zhuǎn)移及正常的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能。此外，HBx還可上調(diào)HepG-2的細胞端粒酶活性，改變抑癌基因p55負調(diào)控功能，抑制細胞凋亡，四細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，與HCC的發(fā)生密切相關(guān)。近幾年國外研究顯示，在HBV感染后約60％肝癌患者血清中可檢測到HBx抗體。血清HBx抗體水平可能成為一種新型的肝癌標志物。

目前，免疫分析技術(shù)在乙型肝炎病毒x蛋白抗體免疫分析產(chǎn)品的應(yīng)用方面仍未見。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)可靈敏檢測乙型肝炎病毒x蛋白抗體的檢測系統(tǒng)及檢測方法，為臨床腫瘤的診斷提供良好的途徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種能夠簡便、快速、靈敏、穩(wěn)定地檢測乙型肝炎病毒x蛋白抗體的試劑盒，該試劑盒適于在產(chǎn)業(yè)上有效地推廣應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種抗乙型肝炎病毒x(HBx)蛋白抗體酶聯(lián)免疫測定試劑盒及其制備方法。

該抗乙型肝炎病毒x蛋白抗體酶聯(lián)免疫測定試劑盒包括：1)重組乙型肝炎病毒x蛋白；2)抗乙型肝炎病毒x蛋白抗體陰、陽性對照品；3)酶標記結(jié)合物；4)顯色底物；5)濃縮洗滌液。