[發(fā)明專利]抑制小鼠MACF1基因表達(dá)的shRNA序列及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410631379.6 | 申請日： | 2014-11-11 |
| 公開（公告）號： | CN104531700B | 公開（公告）日： | 2017-12-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 騫愛榮;商澎;胡麗芳;李潤芝;蘇佩紅;印崇;閆琨;陳志浩;戚依朵;孫瑜隆 | 申請（專利權(quán)）人： | 西北工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 西北工業(yè)大學(xué)專利中心61204 | 代理人： | 王鮮凱 |
| 地址： | 710072 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 抑制 小鼠 macf1 基因 表達(dá) shrna 序列 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種抑制小鼠前成骨細(xì)胞中MACF1基因表達(dá)的shRNA序列，其序列結(jié)構(gòu)是5'-GCTAGTGAATATCCGCAATGATTCAAGAGATCATTGCGGATATTCACTAGC-3'，其中TTCAAGAGA為loop結(jié)構(gòu)。
2.一種權(quán)利要求1所述抑制小鼠前成骨細(xì)胞中MACF1基因表達(dá)的shRNA序列的應(yīng)用，其特征在于采用以下步驟：
步驟一、將上述抑制小鼠前成骨細(xì)胞中MACF1基因表達(dá)的shRNA序列克隆至pGLV3慢病毒載體上，得到重組載體pGLV3-MACF1-shRNA；
①合成相應(yīng)的正義鏈及反義鏈DNA序列，如下所示：
MACF1-shRNA-627正義鏈：
5'-GATCCGCTAGTGAATATCCGCAATGATTCAAGAGATCATTGCGGATATTCACTAGCTTTTTTG-3'
MACF1-shRNA-627反義鏈：
3'-GCGATCACTTATAGGCGTTACTAAGTTCTCTAGTAACGCCTATAAGTGATCGAAAAAACTTAA-5'
上述正義鏈模板的5'端均添加了GATCC，與BamH I酶切后形成的粘端互補；反義鏈模板的5'端均添加了AATTC，與EcoR I酶切后形成的粘端互補；
②將等量的正義鏈和反義鏈DNA混合，進(jìn)行退火，形成DNA雙鏈，得到shRNA模板；
③將pGLV3載體進(jìn)行BamH I和EcoR I雙酶切，得到線性化pGLV3載體；
④將步驟②中的shRNA模板和步驟③中線性化的pGLV3載體進(jìn)行連接，得到重組載體pGLV3-MACF1-shRNA；
步驟二、將上述獲得的重組載體pGLV3-MACF1-shRNA作用于小鼠前成骨細(xì)胞達(dá)到抑制MACF1基因表達(dá)的目的。
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