[發明專利]抑制小鼠MACF1基因表達的shRNA序列及其應用

有效

• 申請號: 201410631379.6
• 申請日: 2014-11-11
• 公開（公告）號: CN104531700B
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 騫愛榮;商澎;胡麗芳;李潤芝;蘇佩紅;印崇;閆琨;陳志浩;戚依朵;孫瑜隆
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 西北工業大學專利中心61204
• 代理人: 王鮮凱

1.一種抑制小鼠前成骨細胞中MACF1基因表達的shRNA序列，其序列結構是5'-GCTAGTGAATATCCGCAATGATTCAAGAGATCATTGCGGATATTCACTAGC-3'，其中TTCAAGAGA為loop結構。

2.一種權利要求1所述抑制小鼠前成骨細胞中MACF1基因表達的shRNA序列的應用，其特征在于采用以下步驟：

步驟一、將上述抑制小鼠前成骨細胞中MACF1基因表達的shRNA序列克隆至pGLV3慢病毒載體上，得到重組載體pGLV3-MACF1-shRNA；

①合成相應的正義鏈及反義鏈DNA序列，如下所示：

MACF1-shRNA-627正義鏈：

5'-GATCCGCTAGTGAATATCCGCAATGATTCAAGAGATCATTGCGGATATTCACTAGCTTTTTTG-3'

MACF1-shRNA-627反義鏈：

3'-GCGATCACTTATAGGCGTTACTAAGTTCTCTAGTAACGCCTATAAGTGATCGAAAAAACTTAA-5'

上述正義鏈模板的5'端均添加了GATCC，與BamH I酶切后形成的粘端互補；反義鏈模板的5'端均添加了AATTC，與EcoR I酶切后形成的粘端互補；

②將等量的正義鏈和反義鏈DNA混合，進行退火，形成DNA雙鏈，得到shRNA模板；

③將pGLV3載體進行BamH I和EcoR I雙酶切，得到線性化pGLV3載體；

④將步驟②中的shRNA模板和步驟③中線性化的pGLV3載體進行連接，得到重組載體pGLV3-MACF1-shRNA；

步驟二、將上述獲得的重組載體pGLV3-MACF1-shRNA作用于小鼠前成骨細胞達到抑制MACF1基因表達的目的。