[發明專利]梅毒螺旋體特異性抗體定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201410629296.3
• 申請日: 2014-11-10
• 公開（公告）號: CN104360067B
• 公開（公告）日: 2016-11-16
• 發明（設計）人: 林麗蓉;楊天賜;劉莉莉;張惠林;童曼莉;張長弓
• 申請（專利權）人: 廈門大學附屬中山醫院;廈門市波生生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/571
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

1.梅毒螺旋體特異性抗體定量檢測試劑盒，其特征在于設有外包裝盒、堿性磷酸酶標記單克隆抗體瓶、發光底物瓶、梅毒螺旋體特異性抗體1000mIU/mL校準品瓶、500mIU/mL校準品瓶、200mIU/mL校準品瓶、50mIU/mL校準品瓶、10mIU/mL校準品瓶、0mIU/mL校準品瓶、洗滌液瓶、重組抗原包被微孔板；堿性磷酸酶標記單克隆抗體瓶、發光底物瓶、梅毒螺旋體特異性抗體1000mIU/mL校準品瓶、500mIU/mL校準品瓶、200mIU/mL校準品瓶、50mIU/mL校準品瓶、10mIU/mL校準品瓶、0mIU/mL校準品瓶、洗滌液瓶、重組抗原包被微孔板設在外包裝盒內；堿性磷酸酶標記單克隆抗體瓶內裝有堿性磷酸酶標記單克隆抗體，發光底物瓶內裝有發光底物，梅毒螺旋體特異性抗體1000mIU/mL校準品瓶內裝有梅毒螺旋體特異性抗體1000mIU/mL校準品，500mIU/mL校準品瓶內裝有500mIU/mL校準品，200mIU/mL校準品瓶內裝有200mIU/mL校準品，50mIU/mL校準品瓶內裝有50mIU/mL校準品，10mIU/mL校準品瓶內裝有10mIU/mL校準品，0mIU/mL校準品瓶內裝有0mIU/mL校準品，洗滌液瓶內裝有洗滌液瓶。

2.如權利要求1所述梅毒螺旋體特異性抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備梅毒螺旋體特異性重組抗原：

采用基因克隆技術，PCR擴增編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其表達，得梅毒螺旋體特異性抗原TPN17和TPN47；

2)制備重組抗原包被微孔板

將步驟1)中的梅毒螺旋重組抗原TPN17和TPN47用包被緩沖液稀釋至20μg/mL，以每孔0.1mL加入微孔板中，4℃包被24h；取出抗原板，風干；用0.01mmol/L?pH7.4磷酸鹽緩沖液配制的1.0％脫脂奶粉，每孔0.2mL，4℃封閉24h，取出用磷酸鹽緩沖液洗滌5次，室溫風干、消毒，制備重組抗原包被微孔板，密封備用；

3)制備天然膜蛋白單克隆抗體

提取梅毒螺旋體標準株Nichols株的膜蛋白，免疫Babl/c小鼠，利用雜交瘤細胞技術，篩選梅毒螺旋體特異性蛋白TPN17和TPN47的單克隆抗體；

4)單克隆抗體的堿性磷酸酶標記

堿性磷酸酶經過碘酸鈉活化，分別與步驟3)單克隆抗體分子的-NH2偶聯，形成堿性磷酸酶標記單克隆抗體；

5)發光底物制備

人工合成金剛烷胺類發光底物及其增強劑，均經無菌過濾，制備發光底物工作液；

6)洗滌液制備

洗滌液為溶有Tween-20的磷酸鹽緩沖液，其中Tween-20的終濃度為0.01％；

7)校準品

將高值梅毒螺旋體特異性抗體用校準品稀釋液稀釋，用國家標準品重復標定三次，三次標定值，取均值作為標定的梅毒螺旋體特異性抗體濃度；所述校準品稀釋液由0.05mmol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、0.01mmol/L的氯化鈉的3％牛血清白蛋白組成，pH值7.4；

梅毒螺旋體特異性抗體標準品濃度系列1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL，分裝成0.5mL/瓶，2～8℃或-20℃存放備用；

8)制備梅毒螺旋體特異性抗體定量檢測試劑盒

將堿性磷酸酶標記單克隆抗體、發光底物、洗滌液、校準品裝入瓶中，再將堿性磷酸酶標記單克隆抗體瓶、發光底物瓶、洗滌液瓶、校準品瓶和重組抗原包被微孔板裝入外包裝盒中，組成梅毒螺旋體特異性抗體定量檢測試劑盒，所述校準品包括1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL共6個濃度。

3.如權利要求2所述梅毒螺旋體特異性抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述梅毒螺旋體標準株Nichols株為Treponema?pallidum?ssp.pallidum?strain?Nichol。

4.如權利要求2所述梅毒螺旋體特異性抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟8)中，所述瓶采用聚乙烯瓶。