[發(fā)明專(zhuān)利]DNA微陣列芯片檢測(cè)與Ⅱ型糖尿病相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410628972.5
• 申請(qǐng)日: 2014-11-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104388555B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王振新;李桃;邢雪峰;鄔東陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 長(zhǎng)春菁華專(zhuān)利商標(biāo)代理事務(wù)所(普通合伙)22210
• 代理人: 南小平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種DNA微陣列芯片檢測(cè)與Ⅱ型糖尿病相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性的方法，屬于DNA微陣列芯片技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

Ⅱ型糖尿病是由遺傳和環(huán)境因素共同作用而引起的一種多基因遺傳異質(zhì)性疾病。從遺傳學(xué)角度研究其發(fā)病機(jī)制對(duì)糖尿病前期的篩查、診斷和干預(yù)非常重要(A genome-wide association study identified novel risk loci for type 2diabetes.Nature.2007,445,881-885；Genome-Wide Association Analysis Identifies Loci for Type 2Diabetes and Triglyceride Levels.Science,2007,316,1331-1336.)。在復(fù)雜疾病的遺傳機(jī)制研究中，單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)分析能為復(fù)雜性狀的遺傳機(jī)制研究提供一條便捷、有效的途徑。篩選能應(yīng)用于與Ⅱ型糖尿病發(fā)病有關(guān)SNPs檢測(cè)的寡核苷酸探針，對(duì)Ⅱ型糖尿病的預(yù)防和個(gè)體化治療等具有重要的意義。

微陣列生物芯片具有樣品用量少和高通量的特性，能對(duì)生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)中的各種生物化學(xué)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行集成，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)基因、配體及抗原等生物活性物質(zhì)乃至細(xì)胞、組織進(jìn)行高效快捷的測(cè)試和分析。例如DNA微陣列芯片已被廣泛應(yīng)用到基因組學(xué)研究、藥物篩選和臨床檢測(cè)中(Resolving Individuals Contributing Trace Amounts of DNA to Highly Complex Mixtures Using High-Density SNP Genotyping Microarrays.PLoS Genet,2008,4,1-9；Technology Insight:microarrays—research and clinical applications.Nature Rev.Endocrinol.,2007,3,594-605.)。

金納米粒子具有優(yōu)良的化學(xué)穩(wěn)定性和獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)。通過(guò)在金納米粒子表面修飾不同的生物分子(如DNA、抗體和凝集素等)作為微陣列生物芯片的標(biāo)記探針，根據(jù)其共振光散射性質(zhì)，可以建立高靈敏度的生物樣品檢測(cè)體系。基于微陣列芯片的共振光散射法比傳統(tǒng)的熒光檢測(cè)法具有更高的靈敏度和更好的穩(wěn)定性(Scanometric DNA Array Detection with Nanoparticle Probes.Science,2000,289,1757-1760；Nanoparticle-Based Bio–Bar Codes for the Ultrasensitive Detection of Proteins.Science,2003,301,1884-1886.)。目前，一種金納米粒子標(biāo)記物通常只能針對(duì)一種生物分子進(jìn)行檢測(cè)，因此，制備一種可以同時(shí)對(duì)多種待測(cè)物進(jìn)行檢測(cè)的金納米粒子標(biāo)記物對(duì)簡(jiǎn)化微陣列生物芯片的檢測(cè)方法具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種DNA微陣列芯片檢測(cè)與Ⅱ型糖尿病相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性的方法，該方法利用6條寡核苷酸修飾的金納米粒子作為標(biāo)記物，及篩選出6條用于Ⅱ型糖尿病檢測(cè)的寡核苷酸探針研制了一種可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)與Ⅱ型糖尿病相關(guān)突變位點(diǎn)的微陣列芯片檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)模擬Ⅱ型糖尿病的DNA樣品和Ⅱ型糖尿病的實(shí)際樣品的檢測(cè)。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下：

一種DNA微陣列芯片檢測(cè)與Ⅱ型糖尿病相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性的方法，包括以下步驟：

(1)合成6條寡核苷酸修飾的金納米粒子標(biāo)記物；

(2)篩選出用于Ⅱ型糖尿病6個(gè)突變位點(diǎn)檢測(cè)的6條特定寡核苷酸探針；

(3)利用標(biāo)準(zhǔn)制作方法將所述特定寡核苷酸探針點(diǎn)樣液點(diǎn)樣到芯片上制備得到DNA微陣列芯片；

(4)用所述的DNA微陣列芯片對(duì)模擬Ⅱ型糖尿病的寡核苷酸靶標(biāo)和Ⅱ型糖尿病實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè)，再用6條寡核苷酸修飾的金納米粒子標(biāo)記物對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行標(biāo)記。

在上述技術(shù)方案中，步驟(1)的具體步驟如下：