[發明專利]一種生物酶法從芝麻葉中提取芝麻葉多糖的方法

在審

• 申請號: 201410628563.5
• 申請日: 2014-11-11
• 公開（公告）號: CN104313085A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 遲宗磊;藏偉功;丁振洋
• 申請（專利權）人: 濟南凱因生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種生物酶法從芝麻葉中提取芝麻葉多糖的方法，包括下述的步驟：

（1）原料預處理

芝麻葉經烘干至其水分含量為2-4%，再超微粉碎至800-1000目；

（2）酶解

將粉碎后的芝麻葉，加水混勻，芝麻葉與水的重量比例為1：6-12，并加入脂肪酶，脂肪酶的添加量0.3-0.5％，酶解溫度45℃，調pH?5.5，將上述的原料置于微波提取設備中提取，微波的功率為400-600W，頻率為800MHZ，酶解0.1-0.5h；

再加入纖維素酶，纖維素酶的添加量為0.4-0.6％、酶解溫度40℃、pH值5，將上述的原料置于微波提取設備中提取，微波的功率為400-600W，頻率為800MHZ，酶解0.1-0.5h；

再加入無花果蛋白酶和中性蛋白酶，無花果蛋白酶的添加量為0.3-0.8%，中性蛋白酶的添加量為0.2-0.5%，酶解溫度為50℃，pH值6.8-7.2，將上述的原料置于微波提取設備中提取，微波的功率為400-600W，頻率為800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下滅酶5-10min；

（3）非水溶性多糖轉化

淀粉酶的添加量為0.8-1.2％、酶解溫度40℃、pH值5，酶解1.5-2.0h后，100-105℃滅酶5-10min；將上述的原料置于微波提取設備中提取，微波的功率為400-600W，頻率為800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下滅酶5-10min；

（4）離心分離

將酶解后的芝麻葉，離心10-20?min?，離心轉速為4500?rpm，將上清液與沉淀分別收集；

（5）可溶性多糖的提取

取步驟（4）中的上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在60-70℃下濃縮，濃縮至其濃度為60-70%，濃縮液按1：4比例加入95%乙醇沉淀靜置10-20小時、離心10-20?min?，離心轉速為4500?rpm，收集沉淀并用乙醇反復清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為4-6%后，再在-1-4℃下進行粉碎，得可溶性多糖；?

上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的芝麻葉的重量百分比。

2.如權利要求1所述一種生物酶法從芝麻葉中提取芝麻葉多糖的方法，其特征在于，所述的脂肪酶的用量為0.4%。

3.如權利要求1所述的一種生物酶法從芝麻葉中提取芝麻葉多糖的方法，其特征在于，所述的纖維素酶的用量是0.5%。

4.如權利要求1所述的一種生物酶法從芝麻葉中提取芝麻葉多糖的方法，其特征在于，所述的淀粉酶的添加量為1.0%。

5.如權利要求1-4中任一項所述的一種生物酶法從芝麻葉中提取芝麻葉多糖的方法，其特征在于，所述的方法包括下述的步驟：

（1）原料預處理

芝麻葉經烘干至其水分含量為2-4%，再超微粉碎至800目；

（2）酶解

將粉碎后的芝麻葉，加水混勻，芝麻葉與水的重量比例為1：8，并加入脂肪酶，脂肪酶的添加量0.4％，酶解溫度45℃，調pH?5.5，將上述的原料置于微波提取設備中提取，微波的功率為500W，頻率為800MHZ，酶解0.2h；

再加入纖維素酶，纖維素酶的添加量為0.5％、酶解溫度40℃、pH值5，將上述的原料置于微波提取設備中提取，微波的功率為500W，頻率為800MHZ，酶解0.2h；

再加入無花果蛋白酶和中性蛋白酶，無花果蛋白酶的添加量為0.5%，中性蛋白酶的添加量為0.4%，酶解溫度為50℃，pH值7.0，將上述的原料置于微波提取設備中提取，微波的功率為500W，頻率為800MHZ，酶解0.2h，酶解后在100℃下滅酶8min；

（3）非水溶性多糖轉化

淀粉酶的添加量為1.0％、酶解溫度40℃、pH值5，酶解1.8h后，100℃滅酶6min；

（4）離心分離

將酶解后的芝麻葉，離心15?min?，離心轉速為4500?rpm，將上清液與沉淀分別收集；

（5）可溶性多糖的提取

取步驟（4）中的上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在65℃下濃縮，濃縮至其濃度為65%，濃縮液按1：4比例加入95%乙醇沉淀靜置15小時、離心15?min?，離心轉速為4500?rpm，收集沉淀并用乙醇反復清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為5%后，再在-1-4℃下進行粉碎，得可溶性多糖；?

上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的芝麻葉的重量百分比。