[發(fā)明專利]梅毒螺旋體特異性抗體化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410628360.6
• 申請日: 2014-11-10
• 公開（公告）號: CN104316681A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉莉莉;楊天賜;童曼莉;張惠林;林麗蓉;張長弓
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院;廈門市波生生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/571
• 分類號: G01N33/571;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.梅毒螺旋體特異性抗體化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于設(shè)有外包裝盒、堿性磷酸酶標(biāo)記重組抗原瓶、發(fā)光底物瓶、梅毒螺旋體特異性抗體陰性對照品瓶、梅毒螺旋體特異性陽性對照品瓶、洗滌液瓶和重組抗原包被微孔板；堿性磷酸酶標(biāo)記重組抗原瓶、發(fā)光底物瓶、梅毒螺旋體特異性抗體陰性對照品瓶、梅毒螺旋體特異性陽性對照品瓶、洗滌液瓶和重組抗原包被微孔板設(shè)在外包裝盒內(nèi)；堿性磷酸酶標(biāo)記重組抗原瓶內(nèi)裝有堿性磷酸酶標(biāo)記重組抗原、發(fā)光底物瓶內(nèi)裝有發(fā)光底物、梅毒螺旋體特異性抗體陰性對照品瓶內(nèi)裝有梅毒螺旋體特異性抗體陰性對照品、梅毒螺旋體特異性陽性對照品瓶內(nèi)裝有梅毒螺旋體特異性陽性對照品、洗滌液瓶內(nèi)裝有洗滌液。

2.如權(quán)利要求1所述梅毒螺旋體特異性抗體化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備梅毒螺旋體特異性重組抗原：

采用基因克隆技術(shù)，PCR擴增編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其表達(dá)，得梅毒螺旋體特異性抗原TPN17和TPN47；

2)制備重組抗原包被微孔板

將步驟1)中的梅毒螺旋重組抗原TPN17和TPN47用包被緩沖液稀釋至20μg/mL，以每孔0.1mL加入微孔板中，4℃包被24h；取出抗原板，風(fēng)干；用0.01mmol/L?pH7.4磷酸鹽緩沖液配制的1.0％脫脂奶粉，每孔0.2mL，4℃封閉24h，取出用磷酸鹽緩沖液洗滌5次，室溫風(fēng)干、消毒，制備重組抗原包被微孔板，密封備用；

3)重組抗原的堿性磷酸酶標(biāo)記

堿性磷酸酶經(jīng)過碘酸鈉活化，分別與步驟1)重組抗原分子的-NH2偶聯(lián)，形成堿性磷酸酶標(biāo)記重組抗原；

4)發(fā)光底物制備

人工合成金剛烷胺類發(fā)光底物及其增強劑，均經(jīng)無菌過濾，制備發(fā)光底物工作液；

5)洗滌液制備

洗滌液為溶有Tween-20的磷酸鹽緩沖液，其中Tween-20的終濃度為0.01％；

6)對照品

梅毒螺旋體特異性抗體陰性對照品：由非梅毒感染的健康人群血清配制而成；

梅毒螺旋體特異性陽性對照品：梅毒患者的特異性抗體陽性血清配制而成；

7)制備梅毒螺旋體特異性抗體化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒

將堿性磷酸酶標(biāo)記重組抗原、發(fā)光底物、洗滌液、梅毒螺旋體特異性抗體陰性對照品、梅毒螺旋體特異性抗體陽性對照品分別裝入瓶內(nèi)，再將堿性磷酸酶標(biāo)記重組抗原瓶、發(fā)光底物瓶、梅毒螺旋體特異性抗體陰性對照品瓶、梅毒螺旋體特異性陽性對照品瓶、洗滌液瓶和重組抗原包被微孔板裝入外包裝盒，組成梅毒螺旋體特異性抗體化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒。

3.如權(quán)利要求1所述梅毒螺旋體特異性抗體化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟7)中，所述瓶采用聚乙烯瓶。