[發明專利]利用多能干細胞制備神經前體細胞的方法

有效

• 申請號: 201410625288.1
• 申請日: 2014-11-07
• 公開（公告）號: CN105624116B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 樂衛東;楊娟;唐宇
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種制備神經前體細胞的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)以維甲酸和組蛋白去乙酰化酶抑制劑誘導培養人多能干細胞，獲得神經球；所述的組蛋白去乙?；敢种苿镸GCD0103；其中，MGCD0103的用量是0.1-3μM，維甲酸的用量是2-50μM；和

(2)培養(1)獲得的神經球使之成熟，獲得神經前體細胞。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，MGCD0103的用量是0.2-2μM。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，MGCD0103的用量是0.3-1μM。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，維甲酸的用量是4-30μM。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中還包括：從培養物中分離出神經前體細胞。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)包括：將人多能干細胞處理成500-1000個細胞的小克隆，以添加了維甲酸和組蛋白去乙酰化酶抑制劑的干細胞維持培養基進行貼壁培養，培養時間為7±2天。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)包括：將步驟(1)的細胞處理成含500-1000個細胞的團塊，在神經球培養液中進行懸浮培養11±2天。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的人多能干細胞包括：胚胎干細胞或誘導多能干細胞。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)之前，還包括：在所述的人多能干細胞中降低HDAC3或SMRT的表達或活性。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，利用RNA干擾的方法降低HDAC3或SMRT的表達。

11.組蛋白去乙?；敢种苿┮约熬S甲酸的用途，用于誘導人多能干細胞分化為神經前體細胞；所述的組蛋白去乙酰化酶抑制劑為MGCD0103；其中，MGCD0103的用量是0.1-3μM，維甲酸的用量是2-50μM。

12.如權利要求11所述的用途，其特征在于，所述的人多能干細胞是降低HDAC3或SMRT的表達或活性的人多能干細胞。

13.如權利要求12所述的用途，其特征在于，所述的降低HDAC3或SMRT的表達或活性通過干擾HDAC3或SMRT轉錄或表達來進行。

14.如權利要求13所述的用途，其特征在于，以干擾HDAC3表達的慢病毒載體降低HDAC3或SMRT的表達或活性；或

以干擾SMRT表達的慢病毒載體降低HDAC3或SMRT的表達或活性。

15.如權利要求14所述的用途，其特征在于，所述的慢病毒載體中，用于干擾的siRNA序列為SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。

16.一種用于制備神經前體細胞的培養基，其特征在于，所述的培養基包括：干細胞維持培養基以及2-50μM維甲酸和0.1-3μM MGCD0103。

17.權利要求16所述的培養基的用途，其特征在于，用于制備神經前體細胞。