[發(fā)明專利]一種固定化酶的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410619223.6
• 申請(qǐng)日: 2014-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN104404021B
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李長(zhǎng)龍;周磊;劉新華;常桑;唐文彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽工程大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/08
• 分類號(hào): C12N11/08
• 代理公司: 蕪湖安匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司34107
• 代理人: 張巧嬋

1.一種固定化酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)、將角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）溶解在N,N-二甲基甲酰胺中，完全溶解后，獲得紡絲液，注入靜電紡絲裝置中進(jìn)行靜電紡絲，將獲得的復(fù)合納米纖維膜置于真空干燥箱中在25℃~40℃條件下干燥5 ~10h，即得到角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）復(fù)合納米纖維膜；

（2）、將角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）復(fù)合納米纖維膜浸入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%~6%的戊二醛溶液中，25℃水浴震蕩1~4h，震蕩速度40~100 r/min，取出后用蒸餾水沖洗，再浸入1~15mg/ml的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞銨鹽酸鹽/N-羥基琥珀酰亞胺的磷酸鹽緩沖液中震蕩活化1~4h，震蕩速度40~100r/min；取出后在pH為7的磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗，得到活化后的角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）復(fù)合納米纖維膜；

（3）、將活化后的角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）復(fù)合納米纖維膜浸入濃度為0.4~1.0mg/ml酶的磷酸鹽緩沖液中，密閉后在4~25℃的恒溫條件下震蕩1~4h，震蕩速度為40~100 r/min，取出，用磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗5次，即可得到角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）復(fù)合納米纖維膜固定化酶；

步驟（1）所述角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）的質(zhì)量比為1:4-9；

步驟（1）所述聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）的丙烯酸甲酯與丙烯酸質(zhì)量比為9-19:1；

步驟（2）中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞銨鹽酸鹽/N-羥基琥珀酰亞胺的磷酸鹽緩沖液，其中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞銨鹽酸鹽與N-羥基琥珀酰亞胺的磷酸鹽的摩爾比為1:2-4。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述紡絲液中角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26%~28%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述紡絲的條件控制為：電壓為14~20kV，紡絲流速為0.2~0.6ml/h、接受距離為10~25cm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所制備得到的角蛋白與聚（丙烯酸甲酯-丙烯酸）復(fù)合納米纖維膜的直徑為300~600nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，步驟（3）所述酶的磷酸鹽緩沖液中所用的酶為：過氧化氫酶、過氧化物酶、脂肪酶或淀粉酶中的一種。