[發(fā)明專利]抗麻疹與百白破四價卵黃抗體制劑的制備工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410618386.2
• 申請日: 2014-11-06
• 公開（公告）號: CN104341499A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫萬邦;郭錦錦;唐艷麗;王少慧
• 申請（專利權(quán)）人: 遵義醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 遵義市遵科專利事務(wù)所 52102
• 代理人: 劉學(xué)詩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種抗麻疹與百白破四價卵黃抗體制劑的制備工藝。

背景技術(shù)

麻疹（measles）是由麻疹病毒引起一種嚴(yán)重危害兒童健康的急性呼吸道傳染病，傳染性極強，兒童是主要易感人群（尤多見于嬰兒）。麻疹病毒（measles?virus）屬副粘病毒科，是麻疹的病原體，麻疹病毒主要通過噴嚏、咳嗽和說話等途徑由飛沫傳播。麻疹最常見并發(fā)癥為肺炎，是麻疹死亡主要原因，還有喉炎、腦炎、肝損害等，特別當(dāng)兒童營養(yǎng)不良時，常常引起并發(fā)癥死亡，迄今為止麻疹仍是低齡兒童中疫苗可預(yù)防性傳染病導(dǎo)致死亡的首要原因之一。包括我國在內(nèi)的世界衛(wèi)生組織西太平洋區(qū)域每年大約有3萬名兒童死于麻疹。因此其危害在疫苗可預(yù)防疾病中仍占有重要地位。目前WHO已將麻疹定為繼天花、脊髓灰質(zhì)炎之后的第三個將被消除或消滅的疾病。

百白破疫苗是百日咳、白喉、破傷風(fēng)混合疫苗的簡稱，它是由百日咳疫苗、精制白喉和破傷風(fēng)類毒素按適量比例配制而成，用于預(yù)防百日咳、白喉、破傷風(fēng)三種疾病。百日咳（bronchocephalitis）是小兒常見的高傳染性急性呼吸道傳染病，感染對象多為5?歲以下嬰幼兒，其致病菌是百日咳桿菌，主要通過空氣傳播，人類是百日咳桿菌的唯一宿主。其主要的臨床表現(xiàn)特征為陣發(fā)性痙攣性咳嗽，咳嗽末伴有特殊的吸氣吼聲，病程可達(dá)數(shù)周甚至3個月左右，故有百日咳之稱。據(jù)據(jù)報道，每年全球有200萬-4000萬例百日咳病例，且約35萬死亡病例，即使在一些免疫接種覆蓋率很高的發(fā)達(dá)國家，近年來百日咳發(fā)病率也呈明顯上升趨勢。白喉（diphtheritis）白喉是由白喉桿菌所引起的一種急性呼吸道疾病，由白喉棒狀桿菌產(chǎn)毒株感染引起，具有極強的傳染性，為乙類傳染病，多發(fā)生于秋冬或早春季節(jié)，15歲以下兒童發(fā)病率約占90%，其中1～5歲兒童發(fā)病率最高。其主要的臨床表現(xiàn)以發(fā)熱，氣憋，聲音嘶啞，犬吠樣咳嗽，咽、扁桃體及其周圍組織出現(xiàn)白色偽膜為特征，嚴(yán)重者可并發(fā)心肌炎和神經(jīng)麻痹，全身中毒癥狀明顯。自從實施白喉毒素的接種以來，白喉的發(fā)病率明顯下降，但大齡的患者構(gòu)成比偏多，所以加強對大齡者的預(yù)防接種是防止白喉再次流行的重要手段。破傷風(fēng)（lockjaw）是由梭狀芽胞桿菌感染引起的常和創(chuàng)傷相關(guān)的一種急性致命性疾病，典型癥狀是在肌緊張性收縮（肌強直、發(fā)硬）的基礎(chǔ)上，陣發(fā)性強烈痙攣，通常最先受影響的肌群是咀嚼肌，隨后順序為面部表情肌、頸、背、腹、四肢肌，最后為膈肌，破傷風(fēng)桿菌及其毒素不能侵入正常的皮膚和黏膜，一切開放性損傷，均有可能發(fā)生破傷風(fēng)，另外還可能發(fā)生于不潔條件下分娩的產(chǎn)婦和新生兒。新生兒破傷風(fēng)由臍帶感染引起，病死率很高，雖然世界衛(wèi)生組織積極推行了全球免疫計劃，據(jù)估計全世界每年仍有近百萬破傷風(fēng)病例，數(shù)十萬新生兒死于破傷風(fēng)。

IgY及理化性質(zhì)：禽類的免疫系統(tǒng)包括細(xì)胞免疫和體液免疫系統(tǒng)，分別受胸腺和法氏囊的控制。當(dāng)機(jī)體受到外來抗原刺激后，法氏囊內(nèi)的B細(xì)胞分化成為漿細(xì)胞，分泌特異性抗體進(jìn)入血液循環(huán)，當(dāng)血液流經(jīng)卵巢時，特異性抗體(主要是IgG)在卵細(xì)胞中逐漸蓄積，形成卵黃抗體（yolk?antibody,?IgY），IgY的理化性質(zhì)與哺乳動物的IgG相似。正常雞IgY的分子量約為180KDa，由兩條輕鏈(2L)和兩條重鏈(2H)組成，分子量分別為60-70KDa和22-30KDa。其等電點約為5.2。?IgY與一般哺乳動物IgG相比，具有較強的耐熱、耐酸、抗離子強度和一定的抗酶降解能力。?在低于75℃條件下，IgY具有良好的熱穩(wěn)定性。IgY制劑在4℃貯存5年或在室溫貯存6個月其活性仍無明顯變化或下降，65℃時可保持24h以上，70℃時加熱90min后其活性才明顯下降，60℃，30min條件下巴氏消毒不影響IgY，高于80℃，大部分IgY失去活性。?IgY對胃蛋白酶有較高的抵抗力，但對胰蛋白酶十分敏感。將胃蛋白酶和IgY在pH2.0溫育1h后，幾乎所有活性喪失，但在pH4.0時1h后可保持91%的活性，甚至溫育10h后仍有63%活性。IgY分別與胰蛋白酶和胰凝乳酶溫育8h，活性分別保持39%和41%。?

IgY的作用機(jī)理：特定病原菌的IgY能直接黏附于病原菌的細(xì)胞壁上，改變病原細(xì)胞的完整性，直接抑制病原菌的生長；IgY可黏附于細(xì)菌的菌毛上，使之不能黏附于腸道黏膜上皮細(xì)胞；一部分IgY在腸道消化酶作用下，降解為可結(jié)合片段，這些片段含有抗體的可變小肽(Fab)部分，這些小肽很容易被腸道吸收，進(jìn)入血液后能與特定的病原菌黏附因子結(jié)合，使病原菌不能黏附易感細(xì)胞而失去致病性，而IgY的穩(wěn)定區(qū)(Fe部分)留在腸內(nèi)。

發(fā)明內(nèi)容