[發(fā)明專利]抗麻疹與百白破四價(jià)卵黃抗體制劑的制備工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410618386.2
• 申請(qǐng)日: 2014-11-06
• 公開（公告）號(hào): CN104341499A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫萬邦;郭錦錦;唐艷麗;王少慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遵義醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K16/12
• 分類號(hào): C07K16/12;C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 遵義市遵科專利事務(wù)所 52102
• 代理人: 劉學(xué)詩(shī)

1.?抗麻疹與百白破四價(jià)卵黃抗體制劑的制備工藝，其特征在于：該工藝包括如下步驟：

1）免疫接種疫苗雞的選擇：選擇健康狀態(tài)良好，17-18周齡粵禽雞；

2）免疫接種疫苗制備及劑量：麻疹疫苗與百白破疫苗1：1比例混合，每只雞免疫接種人用麻疹疫苗每次量為0.75ml；

3）免疫程序：免疫途徑為皮下注射，免疫次數(shù)為4次，免疫時(shí)間為第1次與第2次間隔為3天，第3次與第4次間隔為7天，免疫注射技巧為3點(diǎn)注射；

4）卵黃分離方法與技巧：用75%酒精浸泡雞蛋5-10分鐘，取出雞蛋用清水沖洗，干凈紗布將蛋殼擦干，用剪刀打開蛋殼一個(gè)小孔，讓蛋清緩慢流出，順流盡蛋清，打開蛋殼，小心將整個(gè)蛋黃移至滅菌濾紙上，來回流動(dòng)，除盡蛋清，取蛋黃加入量杯，記錄卵黃量；

5）卵黃抗體水溶性組分液（WSF）制備：按卵黃量的8倍加入滅菌的雙蒸水，用0.1M?HCl調(diào)卵黃稀釋液PH為5.0-5.1，放置在4℃環(huán)境下攪拌8小時(shí)取出，在4℃環(huán)境下將卵黃稀釋液放入離心機(jī)中以10000-12000轉(zhuǎn)/分鐘，離心15分鐘,收取得卵黃抗體水溶性組分液上清液；

6）卵黃抗體分離提取方法：將卵黃抗體水溶性組分液上清液加入8%PEG6000?100ml，攪拌30分鐘，然后在4℃環(huán)境下放入離心機(jī)中以10000-12000轉(zhuǎn)/分鐘，離心15分鐘,收集沉淀，去上清液，沉淀裝入透析袋透析；

7）卵黃抗體提取物無菌處理：將直徑0.22μm過濾膜裝入濾器，高壓蒸汽滅菌后抗體提取物過濾，即為無菌抗體，將卵黃抗體置-20℃保存?zhèn)溆?，保存?年；

8）PEG溶液配制：用PBS(0.01mol/L?PH7.4)配制；

9）透析袋處理：將透析袋放入300ml透析處理液（2%NaHCO₃、1mmol/L?EDTA,PH?8.0）中煮沸10分鐘后，以蒸餾水徹底漂洗后再用300ml（PH?8.0）1mmol/LEDTA液中煮沸10分鐘，最后用滅菌的雙蒸水里外徹底沖洗。

2.如權(quán)利要求1所述的抗麻疹與百白破四價(jià)卵黃抗體制劑的制備工藝，其特征在于：所述步驟3）免疫注射技巧3點(diǎn)注射為，胸部一點(diǎn)，兩翼下各一點(diǎn)。

3.如權(quán)利要求1所述的抗麻疹與百白破四價(jià)卵黃抗體制劑的制備工藝，其特征在于：所述步驟4）打開蛋殼一個(gè)小孔后，從小孔內(nèi)注入少量無菌NS洗凈蛋清。