[發明專利]一種固定化碳酸酐酶及其制備方法

有效

• 申請號: 201410616704.1
• 申請日: 2014-11-05
• 公開（公告）號: CN104404024B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 祝俊;余允東;張敏;陳亭亭;龍輝;汪浩;周曉青;張燕;陳風義
• 申請（專利權）人: 上海立足生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/08
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙)32274
• 代理人: 邱興天

1.一種固定化碳酸酐酶，其特征在于：包括磁性納米顆粒、富醛基復合材料以及碳酸酐酶；所述富醛基復合材料包裹在磁性納米顆粒表面形成富醛基殼，所述富醛基殼的表面醛基與碳酸酐酶通過共價鍵結合；其中，磁性納米顆粒平均粒徑為5～30nm，富醛基殼的平均厚度為5～20nm；所述固定化碳酸酐酶，每克固定化碳酸酐酶包含碳酸酐酶50～300mg。

2.根據權利要求1所述的固定化碳酸酐酶，其特征在于：所述磁性納米顆粒為納米鐵氧化物或納米鈦氧化物。

3.根據權利要求1所述的固定化碳酸酐酶，其特征在于：所述富醛基復合材料包括兩層，從內到外依次為硅烷交聯劑層和多醛基化合物層。

4.根據權利要求1所述的固定化碳酸酐酶，其特征在于：所述碳酸酐酶為α型或β型碳酸酐酶。

5.一種權利要求1～4任意一項所述固定化碳酸酐酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備磁性納米顆粒；

2)取磁性納米顆粒和硅烷交聯劑均勻分散于有機溶劑中，低溫低速攪拌，獲得包覆有硅烷交聯劑的磁性納米顆粒；

3)取包覆有硅烷交聯劑的磁性納米顆粒，均勻分散于多醛基化合物的弱堿性緩沖液中，去除緩沖液，獲得醛基功能化的磁性納米顆粒；

4)取醛基功能化的磁性納米顆粒，加入待固定化的碳酸酐酶溶液，攪拌混合進行共價交聯反應，即制得固定化碳酸酐酶。

6.根據權利要求5所述的制備固定化碳酸酐酶的方法，其特征在于：步驟2)中，所述的硅烷交聯劑為氨丙基三乙氧基硅烷或氨丙基三甲氧基硅烷，所述有機溶劑為無水乙醇，將磁性納米顆粒與硅烷交聯劑超聲分散后，再將分散液加入到有機溶劑中，攪拌分散，從而使分散液與有機溶劑充分混勻，采用磁性分離去除有機溶劑。

7.根據權利要求5所述的制備固定化碳酸酐酶的方法，其特征在于：步驟3)中，所述的多醛基化合物為戊二醛、丁二醛或丙二醛，采用磁性分離去除有機溶劑。

8.根據權利要求5所述的制備固定化碳酸酐酶的方法，其特征在于：步驟4)中，所述醛基功能化的磁性納米顆粒與碳酸酐酶過共價鍵結合形成固定化碳酸酐酶；所述碳酸酐酶溶液濃度為1～5mg/mL，碳酸酐酶與富醛基復合材料包裹的磁性納米顆粒的質量比為1:2～10。

9.根據權利要求5所述的固定化碳酸酐酶制備方法，其特征在于：步驟4)中，所述共價交聯反應條件為25～30℃，搖床混合2～5h，搖床轉速為120～200r/min。