[發(fā)明專利]一種天然皮革的DNA鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410614016.1
• 申請(qǐng)日: 2014-11-04
• 公開（公告）號(hào): CN104328186A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫美蓉;費(fèi)靜;陳青;周之平;王濤;張昌盛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海出入境檢驗(yàn)檢疫局工業(yè)品與原材料檢測(cè)技術(shù)中心;北京自然博物館
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海華工專利事務(wù)所(普通合伙) 31104
• 代理人: 繆利明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程的技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，是關(guān)于一種天然皮革的DNA鑒別方法。

背景技術(shù)

皮革制品的材質(zhì)屬性既是產(chǎn)品品質(zhì)的重要因素，又與市場(chǎng)價(jià)格直接掛鉤，因而關(guān)系到消費(fèi)者的切身利益。按其來源可分為羊皮革、牛皮革、豬皮革、馬皮革等，因其種類不同價(jià)格差異懸殊。市場(chǎng)上充斥著人造皮革假冒天然皮革，以次等的動(dòng)物皮革冒充質(zhì)優(yōu)的動(dòng)物皮革等現(xiàn)象，擾亂了市場(chǎng)的秩序，也損害了消費(fèi)者的權(quán)益。目前天然皮革的主要還要是外觀和嗅覺檢測(cè)為主，有經(jīng)驗(yàn)的操作人員根據(jù)天然皮革特有的氣味，皮質(zhì)的厚度，以前表面毛孔的排布確定皮革的種類。

隨著皮革加工技術(shù)的不斷發(fā)展，貼膜革、移膜革、壓花革等新產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)，給不法分子以次充好創(chuàng)造了條件。豬皮革是最為常見、廉價(jià)的一種皮革，常被用來制成皮包、皮鞋、皮衣、沙發(fā)等家具，具有堅(jiān)固耐用的特點(diǎn)。豬皮革也常加工修飾，用于冒充牛皮等價(jià)格較高的皮革制品，令人防不勝防。因此，有必要提供一種能夠快速、準(zhǔn)確地鑒別豬皮革的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是一種基于DNA檢測(cè)技術(shù)的豬皮革的定性鑒別方法，克服了現(xiàn)有的感官法和顯微鏡法準(zhǔn)確性差的不足。

本發(fā)明的目的在于，提供一種用于熒光定量PCR檢測(cè)豬皮革的特異性引物對(duì)和特異性探針。

本發(fā)明的另一目的在于，提供一種采用熒光定量PCR檢測(cè)豬皮革的方法。

本發(fā)明的再一目的在于，提供一種豬皮革的檢測(cè)試劑盒。

本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題，可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

作為本發(fā)明的第一方面，一種用于熒光定量PCR檢測(cè)豬皮革的特異性引物對(duì)和特異性探針，其中，所述特異性引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示，所述特異性探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

作為本發(fā)明的第二方面，一種采用熒光定量PCR檢測(cè)豬皮革的方法，包括以下步驟：

步驟一、以豬皮革的DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

步驟二、檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)；

其中，用于PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系中含有特異性引物對(duì)和特異性探針，所述特異性引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示，所述特異性探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

其中，所述PCR擴(kuò)增的條件如下：

反應(yīng)體系：2×Taqman?Universal?Master?Mix10μl，DNA模板2μl，特異性引物終濃度為600nM，特異性探針終濃度為400nM，用水補(bǔ)足至20μl；

反應(yīng)條件：95℃，10min；95℃，15s，60℃，45s，40個(gè)循環(huán)。

作為本發(fā)明的第三方面，一種豬皮革的檢測(cè)試劑盒，含有以下試劑：

(a)特異性引物對(duì)，所述特異性引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示；

(b)特異性探針，所述特異性探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

其中，所述試劑盒還包括：

(c)標(biāo)準(zhǔn)參照物。

其中，所述標(biāo)準(zhǔn)參照物為豬皮革DNA，或含有豬皮革擴(kuò)增目的片段的質(zhì)粒DNA，或豬皮革。

作為本發(fā)明的第四方面，所述豬皮革的檢測(cè)試劑盒可用于鑒定豬皮革。

本發(fā)明的有益效果：

1、可簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)和鑒定豬皮革樣品；

2、本發(fā)明基于豬線粒體12SrRNA基因的序列，設(shè)計(jì)的特異性引物和特異性探針的特異性好；

3、檢測(cè)方法靈敏度高，可檢測(cè)到模板含量為1ng?DNA的樣品。

本發(fā)明提供的針對(duì)豬皮革樣品檢測(cè)的特異性引物對(duì)和特異性探針具有高度的特異性和靈敏度，能夠適用于不同工藝處理的豬皮革樣品的鑒別，具有廣泛的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為不同種屬的皮革標(biāo)準(zhǔn)樣品的熒光定量檢測(cè)結(jié)果。

圖2為內(nèi)參基因的熒光定量檢測(cè)結(jié)果。

圖3為不同濃度的豬皮革來源的DNA模板的熒光定量檢測(cè)結(jié)果。

圖4為不同種屬和不同工藝處理的皮革樣品的顯微鏡觀察結(jié)果，其中，(a)為鹿皮革；(b)為豬皮革；(c)為綿羊皮革；(d)為山羊皮革；(e)為牛皮革；(f)為豬皮革。

圖5為不同種屬和不同工藝處理的皮革樣品的熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。