[發明專利]ACE C-結構域選擇性抑制肽及其制備方法

在審

• 申請號: 201410612840.3
• 申請日: 2014-11-04
• 公開（公告）號: CN104327157A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 管驍;劉靜;程文宇
• 申請（專利權）人: 上海理工大學;上海海事大學
• 主分類號: C07K5/062
• 分類號: C07K5/062;C07K5/083;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/20;C12P21/06
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

1.一種ACE?C-結構域選擇性抑制肽，用于抑制ACE中C-結構域活性，其特征在于：

所述ACE?C-結構域選擇性抑制肽的序列為Gly-Tyr以及Ile-Arg-Pro中的任意一種。

2.一種ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，以燕麥分離蛋白為原料，配制質量濃度為5％-10％燕麥分離蛋白溶液，并調節溶液的pH值為8.0～8.5，置于酶膜反應器的反應罐中，溫度控制在40℃～50℃，按酶/底物(質量比)為1.0％～3.0％在蛋白溶液中加入蛋白酶，開啟循環泵，開始酶膜反應，收集膜透過液，得到燕麥蛋白水解產物；

步驟2，將步驟1中的所述燕麥蛋白水解產物干燥后，溶解于碳酸氫銨溶液中，在親和色譜柱上進行親和吸附，至濾出物在214nm處出現最大吸收并趨于平穩為止；

步驟3，對步驟2中的所述親和色譜柱進行洗脫，得到目標肽溶液；

步驟4，對步驟3中的所述目標肽溶液進行濃縮、分離純化、序列解析以及抑制活性驗證，得到所述ACE?C-結構域選擇性抑制肽。

3.根據權利要求2所述的ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于：

其中，所述酶膜反應器中的膜為超濾膜以及納濾膜中的任意一種，所述濾膜的截留分子量為6000Da～10000Da，過濾壓力為0.8～1.0Mpa。

4.根據權利要求2所述的ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于：

其中，所述酶膜反應過程中，利用0.1mol/L的NaOH溶液進行滴定，控制酶解液pH為8.0～8.5。

5.根據權利要求2所述的ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟：

所述酶膜反應結束后，對得到的所述燕麥蛋白水解產物進行噴霧干燥，所述噴霧干燥的進風溫度和出風溫度分別控制在170℃～190℃和90℃～110℃。

6.根據權利要求2所述的ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于：

其中，所述酶膜反應的反應時間為3-4小時。

7.根據權利要求2所述的ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于：

其中，所述蛋白酶為胰蛋白酶。

8.根據權利要求2所述的ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于：

其中，所述親和色譜柱選用tACEΔ36-g13親和色譜柱。

9.根據權利要求2所述的ACE?C-結構域選擇性抑制肽的制備方法，其特征在于：

其中，采用RP-HPLC技術，對所述目標肽溶液進行分離純化，獲得兩種肽組分。