[發明專利]抗人白介素-6受體β鏈單克隆抗體、其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201410612607.5
• 申請日: 2014-11-03
• 公開（公告）號: CN105037548B
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 張冬青;陸梅生;許榮;苗平;周曉薇;陳呢喃;趙蓉;錢柳;余奇文;張繼英;陳雪華;肖漣波;何東儀
• 申請（專利權）人: 上海市免疫學研究所;張冬青;陸梅生;許榮
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;A61K39/395;A61P19/02;A61P29/00;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 上海衡方知識產權代理有限公司 31234
• 代理人: 卞孜真;王先恒

本發明提供了一種抗人細胞表面或血清游離的白介素?6受體β鏈的單克隆抗體，所述抗體分子的Fab段抗原結合部位的輕鏈可變區的cDNA和氨基酸序列如序列No.1和2所示及重鏈可變區的cDNA和氨基酸序列如序列No.3和4所示。本發明還提供了該單克隆抗體的制備方法及其在檢測和干預類風濕性關節炎的診斷和治療的藥物中的用途。體內外實驗證明，本發明的單克隆抗體具有對白介素?6受體β鏈陽性細胞高度的親和性并可通過拮抗調控類風濕性關節炎患者滑膜成纖維細白介素?6受體β鏈?RANKL?WNT5A信號通路的分子學機制，達到緩解類風濕性關節炎患者免疫功能紊亂并介導骨代謝失衡所導致的患者關節損傷之結果。

技術領域

本發明屬于生物制藥領域，尤其涉及一種單克隆抗體，具體來說是一種抗人白介素-6受體β鏈單克隆抗體及其制備方法和用途。

背景技術

分子量為130kD，其細胞外部由6個連續的β片層結構域組成，分別為免疫球蛋白樣結構域(功能域1)，CHR分子(功能域2，功能域3)及3個纖連蛋白Ⅲ樣結構域(功能域4-6)，不同的結構域在配體連接及信號轉導中均發揮重要作用。白介素-6受體β鏈作為白介素-6家族細胞因子——白介素-6，細胞抑制因子(LIF)、抑癌素M(OSM)、睫狀神經營養因子(CNTF)、白介素-11、心肌營養因子1(cardiotrophin-1)及白介素-27的共受體，通過介導不同炎癥因子的信號轉導而參與到多種疾病中，例如在類風濕性關節炎(RA)，巨大淋巴增生病，炎癥性腸病，多發性骨髓瘤，銀屑病，糖尿病，哮喘，肥胖及腫瘤等疾病的發生發展中扮演重要角色。隨著研究的深入，人們逐漸關注到白介素-6受體β鏈相關信號通路可能會成為臨床免疫干預和治療的新靶點。2009年在美國舉行的國際抗體會議已有研究者報告和提出白介素-6受體β鏈的診斷和治療性抗體具有良好的應用前景，因此無論是從免疫藥理還是藥物開發角度，針對白介素-6受體β鏈系統中白介素-6受體β鏈、其相應配體或信號轉導相關蛋白的調控分析都是目前研究熱點。

白介素-6是白介素-6受體β鏈的重要配體之一，與慢性炎癥性疾病、自身免疫性疾病及腫瘤等的發生密切相關。白介素-6受體包括特異性白介素-6受體α鏈(gp80)及白介素-6受體β鏈(gp130)。白介素-6受體α鏈的表達主要局限于肝細胞，白細胞亞群，巨核細胞等細胞表面，而白介素-6受體β鏈則表達于所有細胞表面。白介素-6通過傳統途徑及反式信號途徑兩種方式向細胞內傳導信號。經典途徑中白介素-6先與膜連接白介素-6受體α鏈結合，之后誘導白介素-6受體β鏈同源二聚化，形成高親和力白介素-6/白介素-6受體α/白介素-6受體β鏈復合體，從而進行信號轉導。反式途徑中可溶性形式的游離白介素-6受體α鏈與白介素-6結合后直接與白介素-6受體β鏈形成復合體，因此在不表達膜連接白介素-6受體α鏈的細胞仍可通過白介素-6起反應。研究者認為游離白介素-6受體α鏈及反式信號的存在使得白介素-6成為參與炎癥過程中最為重要的細胞因子之一，其參與多種自身免疫疾病及腫瘤的發生發展，尤其是白介素-6在類風濕性關節炎中的作用機制，一直是臨床研究的熱點。

類風濕性關節炎是一種以滑膜增生及關節進行性破壞為特征的自身免疫性疾病，在我國的發病率約為0.4％-1.0％，重癥類風濕性關節炎患者最終罹患以四肢關節為主的全身各關節嚴重損傷，致殘率高達15％。傳統制劑甲氨蝶呤、來氟米特等藥物的針對性不強，療效常常不盡如人意。近年來免疫學新的干預手段與臨床經典治療方法的協同對于抑制類風濕性關節炎的發生、發展起到了一定效果。現今進入臨床前或臨床研究的治療類風濕性關節炎相關免疫抑制劑主要可分為兩大類：1)細胞因子干預制劑：主要是腫瘤壞死因子(TNF)阻斷劑(阿達木單抗等)、白介素-6受體α鏈阻斷劑(塔西單抗TCZ)；2)蛋白激酶抑制劑：如JAK抑制劑、SYK抑制劑。然而由于類風濕性關節炎患者的個體化差異，對現有的生物制劑反應不一，大部分患者還是經歷了從骨關節炎癥向類風濕性關節炎發展，最終罹患嚴重的關節損傷而致殘。因此亟需我們繼續深入研究類風濕性關節炎的發病機制，研制新的藥物靶點。