[發明專利]一種電化學適配體傳感器、其制備方法及其用途

有效

• 申請號: 201410611415.2
• 申請日: 2014-11-04
• 公開（公告）號: CN104391020A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 吳丹;魏琴;龐雪輝;胡麗華;范大偉
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種電化學適配體傳感器、其制備方法及其用途，更具體而言，本發明涉及一種基于PdCu@MWCNTs納米粒子構建的電化學適配體傳感器、其制備方法，以及由該方法制備的電化學適配體傳感器在測定腺苷中的用途。

背景技術

腺苷是一種遍布人體細胞的內源性核苷，可直接進入心肌經磷酸化生成腺苷酸，參與心肌能量代謝，同時還參與擴張冠脈血管，增加血流量。腺苷對心血管系統和肌體的許多其它系統及組織均有生理作用。因此，建立一種簡便快捷的腺苷的測定方法是十分必要的。目前測定腺苷的方法主要有高效液相色譜法，電滲毛細管電泳法和流動注射法等，但是這些方法在靈敏度、選擇性、穩定性和可操作性方面存在一些局限性。

核酸適配體具有易合成、穩定性好等優點，可方便地在其特定位置用氧化還原試劑、納米粒子、熒光、酶或生物素分子等功能團加以標記，并可長期貯存和在常溫下運輸，所以在分析領域中的應用受到了研究者特別的厚愛，作為一種新型的分子識別元件，它的出現使抗原抗體的反應發生了革命性的變化，大大彌補了現有抗體的不足，也為傳統免疫傳感器發展開辟了一條新的道路。因此近年來基于核酸適配體構建的電化學傳感器的研究受到了極大關注。

石墨烯具有極好的結晶性和非凡的電子學、熱力學和力學性能，因此是人們廣泛關注的焦點。在石墨烯的研究和應用中，為了充分發揮其優良性質，必須對石墨烯進行功能化。也就是在保持石墨烯材料優勢的基礎上，進一步對材料進行性能改性和優化，合成了生物相容性優異的金摻雜的石墨烯，從而達到更好固定修飾材料的目的。

本發明將金摻雜的石墨烯和硫堇溶液滴涂到玻碳電極表面用于固定捕獲探針，PdCu@MWCNTs用于固載腺苷適配體，利用腺苷和其適配體鏈的特異性識別制備了檢測腺苷的電化學適配體傳感器。以硫堇(TH)作為電子媒介體，通過葡萄糖氧化酶(GO_X)和辣根過氧化物酶(HRP)雙酶實現雙重信號的放大。測試結果顯示，上述方法制備的電化學適配體傳感器的靈敏度、選擇性和穩定性高，基于上述發現，發明人完成了本發明。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種電化學適配體傳感器，所述電化學適配體傳感器包括：工作電極、參比電極和對電極，所述工作電極的基底電極為玻碳電極，其表面依次修飾金摻雜的石墨烯、硫堇、捕獲探針、PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷適配體溶液、不同濃度的腺苷。

本發明的再一個目的在于提供一種電化學適配體傳感器的制備方法，所述方法制備的傳感器靈敏度高、重現性好、操作簡便。

本發明的另一目的是提供所述電化學適配體傳感器在測定腺苷中的用途。

為了解決上述技術問題，本發明是通過以下措施來實現的。

本發明的電化學適配體傳感器包括：工作電極、參比電極和對電極，所述工作電極的基底電極為玻碳電極，其表面依次修飾金摻雜的石墨烯、硫堇、捕獲探針、PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷適配體溶液、不同濃度的腺苷。所述工作電極與參比電極、對電極組成電化學適配體傳感器來檢測腺苷。所述參比電極為飽和甘汞電極，對電極為鉑絲電極。所述的捕獲探針為5’-CCCAGGTTCTCT-(CH₂)₆-NH₂-3’?(SSDNA1)，腺苷適配體為3’-SH-TGGAAGGAGGCGTTATGAGGGGGTCCAAGAGA-5’?(SSDNA2)。

本發明的電化學適配體傳感器的制備方法包括以下步驟：

a、制備PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷適配體溶液；

b、制備電化學適配體傳感器工作電極；

c、制作電化學適配體傳感器工作曲線。

其中，步驟a的制備PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷適配體溶液，具體包括以下步驟：

①?將PdCl₂，CuSO₄·5H₂O和L-谷氨酸混合于燒瓶中（質量之比為1:1.6:4），加入40?mL乙二醇（EG），然后在不斷攪拌下逐滴加入8?wt%?KOH/EG調整溶液pH大約為11，此過程溶液由綠色變為深藍色；?

②?將純凈的多壁碳納米管（與CuSO₄·5H₂O的質量之比為3:2）加入到上述混合液中，超聲2?h，得到均勻的懸浮液；