[發(fā)明專利]一種梯度膠及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410609912.9
• 申請(qǐng)日: 2014-11-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104359964A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭華安
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波市鄞州華謙電子有限公司
• 主分類號(hào): G01N27/447
• 分類號(hào): G01N27/447
• 代理公司: 寧波市鄞州盛飛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33243
• 代理人: 張向飛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種凝膠及其制備方法，尤其涉及一種梯度膠及其制備方法。

本申請(qǐng)中下列定義是指：

輕液：梯度膠中濃度較低的膠液；

重液：梯度膠中濃度較高的膠液；

凝膠緩沖液(3.5×)：是指將配制的凝膠緩沖液標(biāo)準(zhǔn)液稀釋3.5倍制得，本發(fā)明中其它類似表示意義均相同。

背景技術(shù)

隨著泳動(dòng)距離的增加，單一濃度的凝膠在一些情況下難以發(fā)揮較好的作用，無(wú)法檢測(cè)、分離全部樣品分子。因此，目前梯度膠已廣泛取代了單一濃度的凝膠。樣品分子在這種梯度膠中泳動(dòng)時(shí)，起初由于樣品分子在孔徑比它大的凝膠區(qū)域中泳動(dòng)，各種大小不同的樣品分子以各自不同的泳動(dòng)率在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)；但后來(lái)，當(dāng)樣品分子達(dá)到凝膠孔徑小于樣品分子大小的區(qū)域中時(shí)，樣品分子就被凝膠孔限所阻，不同大小的樣品分子之間形成穩(wěn)定的區(qū)帶，因此，梯度膠對(duì)樣品分子組成的分析更為細(xì)致，獲得更清晰的樣品分子區(qū)帶，即使電場(chǎng)在繼續(xù)作用時(shí)，各區(qū)帶之間也保持相對(duì)位置不變。因此，梯度膠不僅能進(jìn)一步提高凝膠電泳的分辨率，還能在同一凝膠板中同時(shí)分離，分析大小相差很大的樣品分子。同時(shí)，由于這種梯度膠系統(tǒng)中，凝膠的孔徑大小成相應(yīng)的梯度，用這種方法樣品分子遷移后也不易再擴(kuò)散，是一種較好的分析方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，提出了一種外觀、分辨率、重復(fù)性和穩(wěn)定性好的梯度膠。

本發(fā)明的目的可通過(guò)下列技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：一種梯度膠，所述梯度膠為SDS-PAGE梯度膠，所述SDS-PAGE梯度膠由輕液和重液組成，所述輕液和重液均由以下成分(以體積百分比計(jì))組成：凝膠緩沖液(3.5×)：20-35％；A液：15-70％，雙蒸水：0-60％，甘油：0-15％，AP：0.15-0.40％，TEMED：0.015-0.04％，且所述輕液和重液組成成分及含量不同。

在上述的一種梯度膠中，所述凝膠緩沖液是通過(guò)將262gBis-Tris溶于去礦物質(zhì)水配制成1L的標(biāo)準(zhǔn)液，pH為6.2-6.6。

在上述的一種梯度膠中，所述A液為30％的Acr-Bis水溶液，其中Acr與Bis的質(zhì)量比為19:1。

在上述的一種梯度膠中，所述梯度膠為4％-20％SDS-PAGE梯度膠。

在上述的一種梯度膠中，所述4％-20％SDS-PAGE梯度膠的輕液由以下成分組成：凝膠緩沖液(3.5×)：23mL；A液：14mL，雙蒸水：43mL，AP：300μL，TEMED：30μL；重液由以下成分組成：凝膠緩沖液(3.5×)：20mL；A液：46mL，甘油：4mL，AP：200μL，TEMED：20μL。

在上述的一種梯度膠中，所述梯度膠為8％-16％SDS-PAGE梯度膠。

在上述的一種梯度膠中，所述8％-16％SDS-PAGE梯度膠的輕液由以下成分組成：凝膠緩沖液(3.5×)：20mL；A液：15mL，雙蒸水：39mL，AP：135μL，TEMED：13μL；重液由以下成分組成：凝膠緩沖液(3.5×)：20mL；A液：30mL，雙蒸水：7.5mL，甘油：7.5mL，AP：135μL，TEMED：13μL。

本發(fā)明另一個(gè)目的在于提供上述梯度膠的制備方法，所述制備方法主要包括膠液配制、灌膠、清洗、聚合、拆膠、修整和封裝；

其中，所述膠液配制是按上述配方配制梯度膠的輕液和重液，其中，TEMED和AP在灌膠前加入，且添加順序依次為TEMED、AP；

所述灌膠的具體過(guò)程為：將配制好的梯度膠的輕液、重液置于梯度混合儀的相應(yīng)容器內(nèi)，同時(shí)打開(kāi)磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，然后排除灌膠管內(nèi)氣體后當(dāng)重液和輕液的高度一致時(shí)，打開(kāi)梯度混合儀中間的閥門進(jìn)行灌膠，液體達(dá)到灌膠槽頂部后停止灌膠。

本發(fā)明梯度膠的制備過(guò)程中，灌膠前還要進(jìn)行拼裝夾具等準(zhǔn)備工作，將膠夾表面的碎屑清理干凈，扣緊卡扣，然后將梳子插好，梳子的光滑面朝向板子背面。然后將拼裝好的夾具以數(shù)個(gè)為單位放入灌膠槽，保證有孔道標(biāo)記的一面(背面)靠近灌膠槽的背面，且所有的膠夾保持同一方向，防止取膠時(shí)損壞膠孔。如留有空隙用擋板填充，安裝灌膠閥門，確保連接處不漏液，然后加水檢測(cè)確保灌膠槽不漏液，然后用清水清洗梯度混合儀，保證儀器通暢。