[發明專利]一種液質聯用定量檢測小鼠體內S-構型利伐沙班及R-構型利伐沙班藥物濃度的方法

有效

• 申請號: 201410607169.3
• 申請日: 2014-11-03
• 公開（公告）號: CN104316639A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 潘仙華;閆茜;張瑞敏;于一文;徐娜;許旭;陳思羽
• 申請（專利權）人: 上海應用技術學院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根;馬文峰

技術領域

本發明屬于醫藥檢測技術領域，涉及一種檢測血漿中利伐沙班藥物S-構型及其異構體R-構型含量的方法，具體涉及液質聯用定量檢測小鼠體內S-構型利伐沙班及R-構型利伐沙班藥物濃度的方法。

背景技術

利伐沙班是一種新的口服抗凝藥物，是一個具有高度選擇性和競爭性直接抑制呈游離狀態的Xa因子的藥物，而且還可抑制結合狀態的Xa因子以及凝血酶原活性，對血小板聚集沒有直接作用。其具有生物利用度高，治療疾病譜廣，量效關系穩定，口服方便，出血風險低的特點。利伐沙班(?rivaroxaban,?BAY5927939,商品名:?Xarelto)?化學名為:5-氯-N-{[2-氧代-3-[4-（3-氧嗎啉-4-基）苯基]?噁唑烷酮-5(S)-基]甲基}噻吩-2-羧酰胺。其化學結構式如下所示：

目前，現有文獻所報道的主要是應用反向高效液相色譜法(HPLC)測定中成藥制劑利伐沙班的含量;有報道應用液相色譜質譜聯用技術測定大鼠血漿中利伐沙班血藥濃度，計算利伐沙班靜脈注射后其藥代動力學參數，但該方法只是用的普通C18柱分析的利伐沙班單一構型藥物，沒有測定消旋體給藥的情況，因此得不出利伐沙班樣品是否在小鼠體內發生變化。

因此，建立可靠靈敏的檢測血漿中利伐沙班消旋體濃度的方法，尤其是液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)定量檢測血漿中利伐沙班含量的方法，能夠為利伐沙班給藥后藥物代謝動力學的研究打下堅實的基礎。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷和不足，提供一種液質聯用定量檢測小鼠體內S-構型利伐沙班及R-構型利伐沙班藥物濃度的方法，從而為利伐沙班給藥后藥物代謝動力學的研究打下堅實的基礎。

本發明的技術方案

本發明的一種液質聯用定量檢測小鼠體內S-構型利伐沙班及R-構型利伐沙班藥物濃度的方法，具體包括以下實驗步驟：

（1）、待測小鼠血漿樣品的預處理

采用液液萃取的方法，以二氯甲烷作萃取劑，取50μL小鼠血漿樣品，

加150μL二氯甲烷，渦旋震蕩10s，以10000r/min轉速，離心分離10min,用移液槍移取下層清液于1.5mL離心管中，用N₂吹干，用50μL乙腈超聲溶解后進液質分析；

（2）、液相方法

高效液相色譜儀，為Waters公司的ACQUITY?UPLC

液相色譜柱：CHIRALPAK?IC?(250mm*4.6mm)?5μm

流動相：按體積百分比計算，由乙腈：水：甲酸為97%:3%:0.1%的比例組成的混合溶劑，單通道等度洗脫；

流速：0.9mL/min；

柱溫：室溫；

進樣量：20μL；

檢測波長：全波段掃描

采用柱后分流的方法，液相流速為0.9mL/min,進質譜流速為0.3mL/min；

（3）、質譜方法

質譜儀是Waters公司的Quattro?Premier?XE，采用高純液氮經汽化所得的氮氣作為碰撞氣、霧化氣、輔助氣、錐孔氣，并維持系統的真空狀態；

質譜過程控制參數如下：

采用ESI正離子掃描模式進行多反應監測（以下簡稱MRM)，錐孔電壓35.0V；毛細管電壓3.28kv；離子源溫度115℃；去溶劑溫度400℃；去溶劑氣流量600L/hr；錐孔氣流量50L/hr，定量離子對為436.0/144.9；

（4）、采用外標法定量，使用峰面積計算出血漿中S-構型利伐沙班及R-構型利伐沙班藥物的濃度。

上述的液質聯用定量檢測小鼠體內S-構型利伐沙班及R-構型利伐沙班藥物濃度方法，其檢測限為3ng/mL,定量限為10ng/mL，在10-10000ng/mL范圍內線性關系良好。方法的回收率為86-112%，日內相對標準偏差為5.50-8.86%，日間相對標準偏差8.39-17.6%之間，滿足體內利伐沙班藥物濃度分析的要求。

本發明的有益技術效果