[發(fā)明專利]一種快速提高丹參中迷迭香酸含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410606226.6
• 申請日: 2014-10-31
• 公開（公告）號: CN105613285B
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 季倩;張磊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

1.一種快速提高丹參中迷迭香酸含量的方法，包括如下步驟：

A、外植體處理：取丹參種子作為外植體，接種到MS空白培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成為無菌苗，在無菌狀態(tài)下將丹參無菌苗幼葉、莖、根分別剪下，葉片成塊，莖及根成段；

B、愈傷組織的誘導(dǎo)：選用MS作為丹參愈傷組織誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基，將步驟A制備好的外植體接種于MS培養(yǎng)基中添加0.5mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.5mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的Vc，培養(yǎng)基的蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度為1％，pH值為5.0-6.5，在光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為3000Lux條件下培養(yǎng)30天，溫度為25℃，得到顏色有光澤呈鮮黃綠色、生長旺盛、疏松的愈傷組織；

C、細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)：將步驟B得到的愈傷組織接種到于與步驟B中所使用的MS培養(yǎng)基相同組分和含量的液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度28℃，黑暗條件下，120r/min振蕩培養(yǎng)，每18-20天進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3-15次后得到分散性良好的懸浮細(xì)胞系；

D、茉莉酸甲酯誘導(dǎo)丹參懸浮細(xì)胞：在無菌條件下，取新鮮繼代5次以上得到丹參懸浮細(xì)胞，按懸浮細(xì)胞體積計(jì)算，將茉莉酸甲酯用無菌注射器通過無菌過濾膜注入懸浮細(xì)胞系中，終濃度為0.1mM/L，培養(yǎng)12天以上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提高丹參中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步驟A中，葉片制成0.5×0.5cm的塊，莖及根制成1cm的段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提高丹參中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步驟B中，2,4-二氯苯氧乙酸的配置方法如下：

取10mg的2,4-二氯苯氧乙酸，先溶于95％乙醇中，然后加入去離子水加熱溶解，定容至100mL，冷藏保存。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提高丹參中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步驟B中，6-芐氨基腺嘌呤的配置方法如下：

取50mg的6-芐氨基腺嘌呤，先溶于少量1mol/L的氫氧化鈉中，然后用去離子水定容至100mL，冷藏避光保存。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提高丹參中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步驟B中，萘乙酸的配置方法如下：

取50mg的萘乙酸，先溶于少量1mol/L的氫氧化鈉中，然后用去離子水定容至100mL，冷藏保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速提高丹參中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步驟B中，pH值為6.0-6.5。