[發明專利]基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法

在審

• 申請號: 201410606027.5
• 申請日: 2014-10-31
• 公開（公告）號: CN104316497A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 何丹農;胡沖婭;顏娟;金彩虹
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: G01N21/49
• 分類號: G01N21/49
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 徐紅銀;郭國中

1.一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，將特異性的靶向分子組裝到納米金顆粒表面構成探針，在LSCM下可直接觀察到該探針與細胞共培養后，利用LSCM觀察細胞內部及表面的納米金生物探針的數量、分布及形態；所述方法包括如下步驟：

(1)采用檸檬酸三鈉還原制得金種溶液；

(2)采用種子生長法制得大粒徑的納米金溶液；

(3)將靶向分子加入到步驟(2)制備的納米金溶液中，混合均勻，進行組裝；

(4)組裝好的溶液離心洗滌；

(5)洗滌后得到納米金生物探針，將該探針用細胞培養基重懸浮；

(6)將(5)處理后的納米金生物探針加入到細胞中，于培養箱中與細胞共培養；

(7)將細胞用緩沖液洗滌并用多聚甲醛固定后，即可在激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察成像。

2.如權利要求1所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述納米金溶液所用納米金的粒徑為40-50nm。

3.如權利要求1所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述金種溶液的制備方法為：將1-5mM檸檬酸三鈉溶液100mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入10-30mM?HAuCl₄溶液400μL，得到10nm的金種溶液。

4.如權利要求1所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述納米金溶液的制備方法為：將所述的金種溶液在原容器中降溫至90℃，注入10-30mM?HAuCl₄溶液400μL，30min反應結束后，重復以上步驟兩次；取出22mL樣品，注入1-5mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復本步驟4-6次，得40-50nm的納米金溶液。

5.如權利要求1任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述靶向分子為葉酸、透明質酸、多肽分子中的一種。

6.如權利要求1-5任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述離心洗滌的條件為4℃，12000-5000r/min，5min，洗滌液為去離子水。

7.如權利要求1-5任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述納米金生物探針與細胞于37℃，體積含量5％CO₂的培養箱中共培養時間為30-120min。

8.如權利要求1-5任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述激光的波長為488-633nm。