[發明專利]一種同時測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應蛋白含量的檢測方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201410605080.3
• 申請日: 2014-10-31
• 公開（公告）號: CN104280556A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 楊子學
• 申請（專利權）人: 楊子學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 北京天平專利商標代理有限公司 11239
• 代理人: 繆友菊

技術領域

本發明涉及生物技術領域，涉及一種采用板式發光法同時測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)與C反應蛋白(CRP)含量的檢測試劑盒，從而對缺血性腦卒中的預防、病情評估和/或預后進行輔助判斷的試劑盒，其中，CRP的檢測下限為0.1μg/ml，是一種高靈敏度的CRP分析方法，具體地涉及一種同時測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應蛋白含量的檢測方法及試劑盒。

背景技術

缺血性腦卒中是臨床上的一種常見病、多發病，其常見的病因為動脈粥樣硬化導致管腔狹窄和腦血栓形成，造成局部腦供血區血流中斷，發生腦組織缺血、缺氧、軟化壞死。大量研究標明動脈粥樣硬化本身是一個炎癥的過程，持續的低水平炎癥預示著心腦血管疾病發生的可能性。Lp-PLA2為新近發現的炎癥標志物，屬于磷脂酶A2超家族中的非鈣離子依賴型磷酸酯酶，主要由炎癥細胞(如巨噬細胞、淋巴細胞等)分泌，并受炎癥介質的調節。CRP是由肝臟合成的一種全身性炎癥反應急性期的非特異性標志物，是心腦血管疾病最強有力的預測因子之一，對心血管、腦血管以及外周血管疾病有著最好的預測及預后效果。

有研究表明，缺血性腦卒中發生后，患者Lp-PLA2及CRP水平都明顯升高，其水平隨神經功能缺損程度增加而呈遞增趨勢，差異有統計學意義。同時血清CRP水平對預測腦梗死體積也具有重要意義。Lp-PLA2及CRP的同時檢測有助于更加全面地判斷腦梗的嚴重程度并對其防治與預后提供實驗室參考。

目前對缺血性腦卒中的診斷尚未出現將Lp-PLA2與CRP兩個指標進行聯合的檢測方法。本發明通過對兩個指標的檢測實現對腦梗死體積和神經功能缺損程度的判斷，為評價病情及判斷預后提供了幫助。

發明內容

發明目的：本發明在于提供一種同時測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應蛋白含量的檢測方法及試劑盒，通過建立一種雙指標聯合檢測的免疫分析方法，為缺血性腦卒中的臨床分析，包括神經功能缺損程度以及梗死體積大小的判斷，提供一種靈敏度高、精確性好并且方便快速的試劑盒分析方法。

技術方案：為解決上述技術目的，本發明提出一種同時測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應蛋白含量的檢測方法，包括如下步驟：在同時包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c的微孔板上，加入Lp-PLA2與CRP標準品或EDTA抗凝血液離心后得到的血清樣本到各自的微孔中，振蕩反應后洗滌，加入熒光物質標記的抗Lp-PLA2單克隆抗體b和熒光物質標記的抗CRP單克隆抗體d，振蕩反應，洗滌液洗滌；用熒光儀測定其熒光強度cps，熒光強度，對照標準曲線即可確定樣品中Lp-PLA2與CRP含量。

其中，所述的熒光物質為熒光染料、鑭系螯合物或量子點中的任意一種。

所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b分別識別Lp-PLA2的不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b通過單克隆雜交瘤細胞技術制備得到或者通過噬菌體抗體技術篩選得到。

所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d分別識別CRP的不同表位且互不影響，其中，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d通過單克隆雜交瘤細胞技術制備得到或者通過噬菌體抗體技術篩選得到。

所述的洗滌液為含0.05wt％TWEEN-20的0.01M磷酸鹽緩沖液(1×PBST)。

具體地，抗Lp-PLA2單克隆抗體a和抗CRP單克隆抗體c混合后包被于板孔內的任意位置，且抗Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單克隆抗體d用不同的熒光物質標記；或者，抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c分別包被于板孔內的不同位置，且抗Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單克隆抗體d用相同的熒光物質標記。

本發明同時提供了一種一種同時檢測測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應蛋白含量的試劑盒，其包括如下部分：同時包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c的微孔板、標記熒光物質的抗Lp-PLA2單克隆抗體b與標記熒光物質的抗CRP單克隆抗體d溶液、Lp-PLA2與CRP陽性質控血清、Lp-PLA2與CRP陰性質控血清和濃縮洗液。

其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b分別識別Lp-PLA2的不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b通過單克隆雜交瘤細胞技術制備得到或者通過噬菌體抗體技術篩選得到。