[發(fā)明專利]一種同時測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的檢測方法及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410605080.3
• 申請日: 2014-10-31
• 公開（公告）號: CN104280556A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊子學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 楊子學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 北京天平專利商標代理有限公司 11239
• 代理人: 繆友菊

1.一種同時測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：在同時包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c的微孔板上，加入Lp-PLA2與CRP標準品或EDTA抗凝血液離心后得到的血清樣本到各自的微孔中，振蕩反應(yīng)后洗滌，加入熒光物質(zhì)標記的抗Lp-PLA2單克隆抗體b和熒光物質(zhì)標記的抗CRP單克隆抗體d，振蕩反應(yīng)，洗滌液洗滌；用熒光儀測定其熒光強度cps，熒光強度，對照標準曲線即可確定樣品中Lp-PLA2與CRP含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的熒光物質(zhì)為熒光染料、鑭系螯合物或量子點中的任意一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b分別識別Lp-PLA2的不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b通過單克隆雜交瘤細胞技術(shù)制備得到或者通過噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d分別識別CRP的不同表位且互不影響，其中，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d通過單克隆雜交瘤細胞技術(shù)制備得到或者通過噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的洗滌液為含0.05wt％TWEEN-20的0.01M磷酸鹽緩沖液(1×PBST)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，抗Lp-PLA2單克隆抗體a和抗CRP單克隆抗體c混合后包被于板孔內(nèi)的任意位置，且抗Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單克隆抗體d用不同的熒光物質(zhì)標記；或者，抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c分別包被于板孔內(nèi)的不同位置，且抗Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單克隆抗體d用相同的熒光物質(zhì)標記。

7.一種同時檢測測定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的試劑盒，其特征在于，包括如下部分：同時包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c的微孔板、標記熒光物質(zhì)的抗Lp-PLA2單克隆抗體b與標記熒光物質(zhì)的抗CRP單克隆抗體d溶液、Lp-PLA2與CRP陽性質(zhì)控血清、Lp-PLA2與CRP陰性質(zhì)控血清和濃縮洗液。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b分別識別Lp-PLA2的不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b通過單克隆雜交瘤細胞技術(shù)制備得到或者通過噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d分別識別CRP的不同表位且互不影響，其中，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d通過單克隆雜交瘤細胞技術(shù)制備得到或者通過噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的Lp-PLA2與CRP陽性質(zhì)控血清是在正常人血清中分別添加中添加Lp-PLA2與CRP標準品制得，添加量為正常血清中Lp-PLA2和CRP含量的臨界值的3倍；其中，正常血清Lp-PLA2Lp-PLA2和CRP含量的的臨界值分別為175ng/ml和1μg/ml；所述的Lp-PLA2與CRP陰性質(zhì)控血清是正常人血清，其中，Lp-PLA2含量低于175ng/ml，CRP含量低于1μg/ml。